[发明专利]一种适用马铃薯品种“川芋10号”转基因方法

权利要求书

1.将挑取含有目的基因的农杆菌单菌落接种至5mL液体LB中（含50 mg/L 卡纳霉素和50 mg/L 利福平），200rpm 28℃培养过夜，二天按1：200的比例稀释菌液于新鲜的液体LB中，继续培养待OD600=0.1-0.3时取出备用。

2.在超净工作台中将试管薯放在被少量无菌水浸湿的滤纸上，在其上将试管薯块切成1-2mm厚的薄片（顶端和底部舍去），并转移至水中备用，以防止材料发生栓化。

3.取制备好的菌液，5000 rpm离心3min，弃上清，加入液体MS重悬菌体用于浸染，室温下，转移试管薯切片至重悬菌体中浸染5min左右，其间不断摇动以利于充分接触。

4.侵染结束后将薯片移至无菌滤纸上吸干水分，然后将薯片平放入共培养基上，在24℃，黑暗中共培养2d， 共培养基配方是MS+3％蔗糖+0.8%琼脂，PH值调至5.8-6.0。

5.共培养后，放入含500 mg/L Cef+500 mg/L Carb的无菌水中清洗3-4遍，吸干水分后转入芽筛选培养基中，芽筛选培养基配方为MS+3％蔗糖+0.8%琼脂+2.5mg/L 6-BA +0.25mg/L IAA +0.25mg/L 2,4-D + 500 mg/L Cef +  500 mg/L Carb ，PH值调至5.8-6.0。

6.每隔12d左右换1次新鲜的芽筛选培养基,在最初一段时间，去除从块茎薄片边缘再生的芽，30d之后可将从薯肉上长出的芽，待芽长到2-3cm左右时，剪下接入生根筛选培养基中。

7.生根培养基的配方是 MS+3％蔗糖+0.8%琼脂+0.25mg/L IAA +500 mg/L Cef+500 mg/L Carb 最终获得马铃薯转基因植株，通过PCR检测，得到转基因株系的阳性率达到80%以上。