[发明专利]检测大肠杆菌O157:H7的荧光免疫层析试纸条

说明书

技术领域

本发明属于检测技术领域，涉及一种检测大肠杆菌O157:H7的荧光免疫层析试纸条及其应用。

背景技术

大肠杆菌O157:H7是一种肠道致病菌，它主要是通过摄入被污染的食物或水，或与带菌动物接触使人感染，严重可致死亡。大肠杆菌O157:H7感染已逐渐成为威胁人类健康的重要公共卫生问题，建立快速、灵敏度高的检测方法是防控大肠杆菌O157:H7感染的关键。

量子点是一种新型的纳米材料，具有优良的荧光特性。与其它的免疫学分析法相比，基于量子点的免疫分析法在特异性、敏感性和准确性方面具有巨大的优势，在食品微生物检测中有广阔的应用前景。目前还没有关于利用量子点标记的免疫层析试纸条检测大肠杆菌O157:H7的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速检测大肠杆菌O157:H7的量子点免疫层析试纸条。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

一种检测大肠杆菌O157:H7的荧光免疫层析试纸条，它是采用以下步骤的方法制备而成的：

1）制备水溶性核壳结构的CdTe/CdS量子点；

2）用CdTe/CdS量子点标记大肠杆菌O157:H7兔多克隆抗体；

3）将CdTe/CdS量子点标记的大肠杆菌O157:H7兔多克隆抗体涂覆于玻璃纤维素膜上形成结合垫，大肠杆菌O157:H7多克隆抗体与羊抗兔IgG分别包被在硝酸纤维素膜上形成检测线和质控线，在pvc底板上将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装成荧光免疫层析试纸条。

优选的：所述水溶性核壳结构的CdTe/CdS量子点是采用无机水相合成法，以巯基丙酸为稳定剂在水溶液中合成的，合成的条件是：Cd²⁺与Te^2-的摩尔比为Cd²⁺与Te^2-的摩尔比为3~7∶1，巯基丙酸与Cd²⁺的摩尔比为1.5~3.5∶1，反应体系的pH值为7~11，温度为80~100℃，CdTe核的回流时间为0.5~2.5h；CdS壳的回流时间为0.5~2.5h。

进一步优选的合成条件是：Cd²⁺与Te^2-的摩尔比为5∶1，巯基丙酸与Cd²⁺的摩尔比为2.5∶1，反应体系的pH值为9，温度为95℃，CdTe核的回流时间为1h；CdS壳的回流时间为1h。

优选的：步骤2）中所述大肠杆菌O157:H7兔多克隆抗体的标记方法是：以EDC·HCl和NHS为偶联剂，先将CdTe/CdS量子点表面配体的羧基活化，然后在pH为7.4，0.01mol/L PBS缓冲体系中，37℃摇床避光反应1.5h，100μL CdTe/CdS量子点与80μL 1mg/mL抗大肠杆菌O157:H7多克隆抗体反应。

所述的荧光免疫层析试纸条在大肠杆菌O157:H7快速检测中的应用。

本发明的有益效果是：本发明荧光免疫层析试纸条检测大肠杆菌O157:H7的检测速度快，灵敏度高（灵敏度比胶体金试纸条高10倍），特异性强，试纸条的稳定性好。

附图说明

图1是透射电镜（TEM）对实验制备的CdTe/CdS QDs进行的结构表征，CdTe/CdS QDs为近球形颗粒，粒径分布较均匀，平均粒径约为3nm。

图2是核壳量子点在优化条件下的荧光强度，荧光强度为726.4。

图3是CdTe/CdS量子点偶联兔IGg前后的琼脂糖凝胶电泳，1泳道为CdTe/CdS量子点，2泳道为共价偶联的量子点-抗体，3泳道为直接偶联的量子点-抗体，4泳道为兔IgG；

图4是量子点与抗体偶联前后的荧光图谱。曲线b、c分别代表共价偶联和直接偶联的偶联物，相比未偶联抗体的量子点a，荧光发射峰轻微红移；偶联后，荧光强度减小，共价偶联得到的偶联物的荧光强度比直接偶联强。

图5是不同pH值对量子点-抗体偶联物的影响。随pH值的增大，量子点-抗体偶联物的荧光强度先增大后减小，当pH为7.4时，荧光强度最大。

图6是不同温度和时间对量子点-抗体偶联物的影响。反应温度不同，偶联物荧光最高峰出现的时间不同，25℃反应体系中荧光最高峰出现在2.5h处，37℃反应体系中荧光最高峰出现在1.5h处。反应初的2h内，37℃反应体系中偶联物的荧光强度明显高于25℃反应体系，之后荧光强度略低于25 ℃反应体系。

图7是免疫层析试纸条组装示意图。

图8是免疫层析试纸条结果判定标准图。