[发明专利]禽肺炎病毒Taqman探针荧光定量RT-PCR检测试剂盒

权利要求书

1.用于检测禽肺炎病毒的组合物，由一个引物对和一个探针组成的组合物；所述引物对由引物1和引物2组成，所述引物1为序列表中序列1所示的单链DNA，所述引物2为序列表中序列2所示的单链DNA；所述探针的序列为序列表中序列3。

2.用于检测禽肺炎病毒的探针，其特征在于：所述探针的序列为序列表中序列3。

3.根据权利要求1所述的组合物或权利要求2所述的探针，其特征在于：所述探针的5’端标记有报告荧光染料A，3’端标记有淬灭荧光染料B；

所述报告荧光染料A具体为FAM；所述淬灭荧光染料B具体为Eclipse。

4.用于检测禽肺炎病毒的试剂，由权利要求1-3中任一所述的组合物或探针、Taqman探针荧光定量RT-PCR扩增缓冲液和水组成。

5.根据权利要求4所述的试剂，其特征在于：所述Taqman探针荧光定量RT-PCR扩增缓冲液，包括dNTPs、Mg²⁺、DNA聚合酶、反转录酶和RNA酶抑制剂；

所述SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR扩增缓冲液具体为如下缓冲液A或缓冲液B：

所述缓冲液A中，所述dNTPs、所述Mg²⁺、所述DNA聚合酶、所述反转录酶和所述RNA酶抑制剂的配比为：0.1μmol：0.25μmol：2.5U：200U：40U；

所述缓冲液B，由反转录缓冲液和Taqman探针荧光PCR缓冲液组成；所述反转录缓冲液中含有配比为0.02μmol：0.1μmol：2.5U：20U的所述dNTPs、所述Mg²⁺、所述反转录酶和所述RNA酶抑制剂；所述Taqman探针荧光PCR缓冲液中含有配比为0.01μmol：0.025μmol：5U的所述dNTPs、所述Mg²⁺和所述DNA聚合酶。

6.用于检测禽肺炎病毒的试剂盒，含有下述a）和b）：

a）禽肺炎病毒阳性质粒；

b）权利要求1-3中任一所述的组合物或探针，或权利要求4或5所述的试剂。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述禽肺炎病毒阳性质粒为含有序列表中序列4的第753-849位核苷酸的质粒；

所述禽肺炎病毒阳性质粒具体为将序列表中序列4的第753-849位核苷酸所示DNA片段与pMD18-T载体相连后得到的重组质粒。

8.根据权利要求1-3中任一所述的组合物或探针，或权利要求4或5所述的试剂，或权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于：所述引物1、所述引物2和所述探针的摩尔比为1：1：1。

9.如下c）或d）的应用：

c）权利要求1-3中任一所述的组合物或探针在制备权利要求4或5所述的试剂，或权利要求6或7所述的试剂盒中的应用；

d）权利要求1-3中任一所述的组合物或探针，或权利要求4或5所述的试剂，或权利要求6或7所述的试剂盒，在制备检测或辅助检测待测样品中是否含有禽肺炎病毒的产品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：d）所述应用中，所述检测或辅助检测待测样品中是否含有禽肺炎病毒为用权利要求1-3中任一所述的组合物或探针，或权利要求4或5所述的试剂，或权利要求6或7所述的试剂盒对所述待测样品进行Taqman探针荧光定量RT-PCR反应；

所述进行Taqman探针荧光定量RT-PCR反应的退火温度为60℃-62℃。