[发明专利]IRTKS基因剔除的小鼠模型及其构建方法与应用

权利要求书

1.IRTKS基因剔除的小鼠模型的构建方法，其特征在于，通过同源重组的方法，用2.0-kbPGK/Neo序列取代小鼠IRTKS基因中含有ATG起始密码子的exon1序列，得到IRTKS基因剔除的小鼠模型。

2.如权利要求1所述的小鼠模型的构建方法，其特征在于，该方法的具体步骤包括：

1）构建IRTKS-KO质粒；

2）ES细胞打靶并筛选阳性ES克隆；

3）将阳性ES克隆注射入小鼠囊胚，得到嵌合小鼠；

4）将嵌合小鼠与雌性小鼠杂交，获得IRTKS基因剔除的小鼠模型。

3.如权利要求2所述的小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤1），IRTKS KO Vector质粒DNA经NotI酶切，消化，分离纯化，乙醇沉淀，无菌PBS重悬，获得IRTKS-KO质粒。

4.如权利要求2所述的小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤2），ES细胞为SCR012，克隆筛选条件为300μg/ml G418、2μM GanC筛选8天。

5.如权利要求2所述的小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤2）还包括用PCR方法鉴定阳性ES克隆。

6.如权利要求5所述的小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤2），5’PCR鉴定的引物对序列如SEQ ID No:1～2所示；3’PCR鉴定的引物对序列如SEQ ID No:3～4所示。

7.如权利要求2所述的小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤3），所述嵌合小鼠为嵌合率在50％以上的雄性小鼠。

8.如权利要求2所述的小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤3）提供囊胚的小鼠和步骤4）所述的雌性小鼠为C57BL系小鼠。

9.利用权利要求1-8中任意一项所述的方法获得的IRTKS基因剔除的小鼠模型在糖尿病发病机制的研究、诊断和治疗以及糖尿病治疗药物的评价和筛选中的应用。

10.利用权利要求1-8中任意一项所述方法构建的IRTKS基因剔除的小鼠模型。