[发明专利]一种鱼类软骨生产硫酸软骨素联产水解胶原蛋白的方法

权利要求书

1.一种鱼类软骨生产硫酸软骨素联产水解胶原蛋白的方法，其特征在于，步骤包括：

一、预处理：取新鲜鱼骨用水浸泡3h后置于蒸煮锅中100^oC煮30min，捞出后剔除鱼肉和油脂，用清水冲洗，切碎成大小为1cm×1cm的块状，称重备用；

二、酶解：将预处理的软骨按料液比1:2加入pH=8.5的水溶液，加入酶水解，在水解过程中应不断调节溶液pH保持在8.0-8.5；

三、热处理/过滤浓缩：热处理是在酶解液中加入稀盐酸或磷酸调整溶液pH值，加热升高温度至溶液分层，继续加热30min，放置过滤，除去未水解酸性蛋白，溶液分层过滤后浓缩；

四、树脂吸附：滤液浓缩后经离子交换树脂连续交换吸附，交换后的料液为水解蛋白质和多糖溶液，滤液浓缩后经树脂吸附，乙酸-乙酸钠缓冲液洗脱，收集洗脱液；

五、精制硫酸软骨素：洗脱液经双氧水脱色后加入2倍体积的分析纯酒精沉淀得到硫酸软骨素，沉淀离心后置于恒温干燥箱中，控温60^oC干燥4h得纯品硫酸软骨素；

六、回收蛋白：树脂吸附后的未结合的水解蛋白质溶液经喷雾干燥，回收制备水解蛋白粉。

2.根据权利要求1所述的鱼类软骨生产硫酸软骨素联产水解胶原蛋白的方法，其特征在于：所述步骤二中水解完全程度的判定是：取少许水解液滴加50g/L三氯醋酸观察溶液混浊程度确定。

3.根据权利要求1所述的鱼类软骨生产硫酸软骨素联产水解胶原蛋白的方法，其特征在于：所述步骤二中加入的酶是木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和复合酶，添加比例为1：1：1或1：2：1或1：1：2。

4.根据权利要求1所述的鱼类软骨生产硫酸软骨素联产水解胶原蛋白的方法，其特征在于：所述步骤二中，酶解时间为2-6h，酶解温度为37-65^oC，酶用量为2-10g/kg。

5.根据权利要求1所述的鱼类软骨生产硫酸软骨素联产水解胶原蛋白的方法，其特征在于：所述步骤三中，酶解后热处理的温度为70-90^oC，pH为3.0-4.5。

6.根据权利要求1所述的鱼类软骨生产硫酸软骨素联产水解胶原蛋白的方法，其特征在于：所述步骤六中树脂吸附过程中采用的树脂为D001-cc树脂，装于3支3×25cm层析柱中，分别用pH6.0、pH5.0、pH4.0的乙酸-乙酸钠缓冲液平衡树脂，至流出液与洗脱液pH值相同，平衡完成，上样洗脱：分别加入上述硫酸软骨素层析液20mL，至层析液完全进入树脂后，用洗脱液淋洗柱壁2次，再分别用pH4.0、pH5.0、pH6.0的乙酸-乙酸钠缓冲液洗脱，流速60mL/h，收集流出液，将乙醇加入上述离子交换层析液中至乙醇含量达75%，硫酸软骨素析出，过滤，乙醇洗涤2次，烘干，得硫酸软骨素纯品。