[发明专利]用于黄瓜‘粤秀3号’杂交种子纯度鉴定的引物及方法

权利要求书

1.用于黄瓜‘粤秀3号’杂交种子纯度鉴定的引物，为下述引物组1或引物组2，其中，引物组1的序列为：

3B-10-F：5’-CATCACGACCCTCTCCATCT-3’（SEQ ID NO:1）；

3B-10-R：5’-GGGTTTGATAGTGGAGATTATTCA-3’（SEQ ID NO:2）；

引物组2的序列为：

2B-41-F：5’-CACCGAGAACGAAAGAAGGA-3’（SEQ ID NO:3）；

2B-41-R：5’- TCTAAGGTGGGAGGGAAACC-3’（SEQ ID NO:4）。

2.一种用于黄瓜‘粤秀3号’杂交种子纯度鉴定的试剂盒，其包括权利要求1所述的引物组1或/和引物组2。

3.一种用于黄瓜‘粤秀3号’杂交种子纯度鉴定的方法，包括如下步骤：

（1）提取待检黄瓜种子或幼苗基因组DNA；

（2）以黄瓜基因组DNA为模板，使用权利要求1引物组1或引物组2进行PCR扩增；

（3）对扩增的产物进行凝胶电泳；

（4）对电泳结果进行分析，只有同时具有亲本特异性条带的单株才为真正的杂交种，缺少其中的任意一条带记为假杂种，其中，引物组1产生128bp的母本特异标记，产生158bp的父本特异标记，引物组2产生177bp的母本特异标记，189bp的父本特异标记为。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，PCR扩增的20μl反应体系为：基因组DNA 5ng，Mg²⁺0.15mmol·L^-1，dNTP 0.2mmol·L^-1，SSR引物0.25 mmol·L^-1，Taq 酶0.2U，10×PCR buffer:2.0μl，ddH₂0补足至20μl。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，PCR扩增的程序为：94℃预变性5min后，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸40s，35个循环后，72℃保持7min，然后置于4℃保存待检测。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述凝胶电泳为8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。