[发明专利]一种肌酸激酶同功酶纳米磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体的，本发明提供了一种肌酸激酶同功酶（CK-MB）纳米磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

肌酸磷酸激酶(Creatine Kinase,CK)大量存在于心肌、骨骼肌和脑等组织，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶。天然的CK分子是一个紧密的球状结构，是由两个亚基（M型亚基和B型亚基）组成的二聚体。CK有三种主要的同工酶，即CK-MM，CK-MB，CK-BB。其中CK-BB主要存在于大脑、前列腺、肠、肺；骨骼肌中存在大量的CK-MM和少量的CK-MB；而心肌组织虽以CK-MM为主，但CK-MB所占比例远较其他组织高。

由于心肌是唯一含CK-MB较多的器官，因此与其它几种可能反映心肌损伤的酶相比，CK-MB的测定最宜作为心肌损伤的定量观察指标。CK-MB诊断透壁型心肌梗死的敏感性和特异性均极高，在起病4h后增高。16-24h后达高峰，3-4d恢复正常。

CK-MB在急性心肌梗死（AMI）后仍保存在高水平，则意味着心肌坏死还继续进行；若恢复正常后再次升高，提示原梗死部位扩展或有新的梗死出现，由于半衰期短，CK-MB和亚型在监测再发损伤中比肌钙蛋白更为敏感，因为肌钙蛋白可在血中保持高值数天；其增高的程度能较准确地反映梗死的范围；其高峰出现时间是否提前有助于判断溶栓治疗是否成功一。若单独进行检测，CK-MB是很理想的标志物；与心肌肌钙蛋白进行联合检测，更有助于提高AMI的诊断阳性率。

目前，临床领域应用的CK-MB检测方法主要有电泳、免疫抑制法、酶联免疫测定法和化学发光免疫测定法等。

电泳法和免疫抑制法均会受到溶血和巨CK的干扰，免疫抑制法还会受到CK-BB的干扰，限制了这两种检测方法的应用。

酶联免疫测定法具备其操作简单、试剂有效期长无污染、高于胶体金的敏感性、特异性好、结果可用仪器测定等特点得以推广，但由于敏感性相对较低，所用标记酶与底物可定量测定范围窄，及仪器测定范围窄等缺点，限制了其在微量免疫定量测定中的应用。

化学发光免疫测定其研究起步于80年代初，快速发展应用于90年代，为当今最为敏感的微量免疫测定法。目前主要采用发光板方法，板间差异大，测值重复性较差。

发明内容

本发明要解决的问题是提供肌酸激酶同功酶的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了测值重复性差，酶联免疫法灵敏度低，检测范围窄等缺陷。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：肌酸激酶同功酶（CK-MB）纳米磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括：肌酸激酶同功酶校准品；偶联有链霉亲和素的纳米磁微粒悬浮液；生物素标记的肌酸激酶同功酶抗体；肌酸激酶同功酶抗体酶结合物，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；肌酸激酶同功酶质控品，质控品包括浓度12ng/mL的低值质控品和300ng/mL的高值质控品；化学发光液A液和B液，A液为5mmol/L，pH8.6的Tris-HCl缓冲液，且该缓冲液中含有终浓度0.7g/L鲁米诺和终浓度0.165g/L对碘酚；B液为0.675g/L过氧化脲；20倍浓缩洗液；反应管。

进一步，所述的纳米磁微粒是表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径10-50nm。

进一步，所述的反应管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。

试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

（1）肌酸激酶同功酶校准品的配制：

将肌酸激酶同功酶抗原用校准品稀释液（含1%BSA的磷酸盐缓冲液）配制成校准品浓储液，以企业标准品进行定标，将浓储液用校准品稀释液稀释至工作浓度，分别为0，3，15，50，200，800ng/mL；

企业标准品制备方法：用含1%BSA的磷酸盐缓冲液将CK-MB抗原按照1:10、1:10²、1:10³、1:10⁴、1:10⁵、1:10⁶、1:10⁷的比例进行稀释，使用罗氏公司CK-MB定量检测试剂盒（货号：11821598，规格100人份）测定，根据测定结果，建立稀释比例与测定浓度的曲线。按照曲线方程分别计算出浓度为3，15，50，200，800ng/mL的稀释比例，按此比例配制企业标准品，使用罗氏产品进行多次测定，确定企业标准品浓度。配制的企业标准品以0.5mL/管分装，用冷冻干燥机冻干，-20℃保存。