[发明专利]一种获得微环DNA的亲本质粒及其应用

权利要求书

1.一种获得微环DNA的亲本质粒，其特征在于，所述亲本质粒是在真核表达载体pEGFP-N1-attB质粒中插入attR片段和attL片段以及ΦC31整合酶基因表达盒构建而成，其中所述attR片段插入pEGFP-N1-attB质粒的限制性内切酶SpeⅠ和DraⅢ的酶切位点之间，所述attL片段插入pEGFP-N1-attB质粒的限制性内切酶AflⅢ和AseⅠ的酶切位点之间，所述ΦC31整合酶基因表达盒插入pEGFP-N1-attB质粒的限制性内切酶AflⅢ的酶切位点。

2.如权利要求1所述获得微环DNA的亲本质粒，其特征在于，所述attR片段为λ噬菌体attR片段，所述attL片段为λ噬菌体attL片段。

3.如权利要求1所述获得微环DNA的亲本质粒，其特征在于，所述ΦC31整合酶基因表达盒中的启动子片段为PGK启动子片段。

4.一种包含如权利要求1～3任一项所述获得微环DNA的亲本质粒的重组表达转化体。

5.一种转基因方法，其特征在于，所述转基因方法包括以下步骤：

（1）在权利要求1～3任一项所述获得微环DNA的亲本质粒的多克隆位点中插入外源基因；

（2）将步骤（1）所得的获得微环DNA的亲本质粒中加入LR克隆酶进行LR重组反应，得到包含微环DNA和表达ΦC31整合酶的微质粒的LR重组体系，所述LR重组反应的条件为：20～30℃，反应3～14小时；

（3）利用所得LR重组体系转染宿主细胞。

6.如权利要求5所述的转基因方法，其特征在于，步骤（2）所述LR重组体系中微环DNA与表达ΦC31整合酶的质粒的摩尔比为1:1～1:100。

7.如权利要求5所述的转基因方法，其特征在于，步骤（3）所述宿主细胞为真核细胞。

8.如权利要求1～3任一项所述获得微环DNA的亲本质粒在制备转基因载体中的应用。

9.如权利要求1～3任一项所述获得微环DNA的亲本质粒在制备基因治疗药物中的应用。