[发明专利]抗β-伴大豆球蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗β-伴大豆球蛋白的单克隆抗体及其应用。

背景技术

大豆中含有丰富的蛋白质，由于其必需氨基酸（如赖氨酸、苏氨酸和色氨酸）组成比例适宜，是畜禽优质的植物性蛋白源。但大豆中含有的大豆抗原蛋白所导致的动物过敏反应越来越受到人们的关注。在幼龄动物饲料中添加豆粕作为蛋白质来源会导致仔猪、犊牛等的腹泻、生长性能下降、肠黏膜细胞增生以及免疫功能失调等一系列不良反应，严重的甚至导致死亡。

β-伴大豆球蛋白是大豆中主要的致敏蛋白质，占大豆籽实总蛋白的10.0%-12.7%，占总球蛋白的30.0%，其分子量为140—180kDa，是一类糖基化蛋白质，由分子量大小分别为58—77、58—83和42—53kDa的三种亚基组成。β-伴大豆球蛋白具有含量丰富、热稳定性强、具有较强免疫原性的特点，经常能够引起过敏反应，如能引起婴幼儿、5-6%的儿童和2-4%的成年人腹泻，严重的伴有颤抖、咽喉水肿和急性哮喘等症状，在畜牧业，β-伴大豆球蛋白能导致断奶仔猪和妊娠母猪、犊牛、大鼠等幼龄动物的过敏反应，表现为腹泻、生长性能下降直至死亡。定量检测不同大豆制品中的β-伴大豆球蛋白的含量具有重要的理论意义及应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗β-伴大豆球蛋白的单克隆抗体及其应用。

本发明所提供的抗β-伴大豆球蛋白的单克隆抗体，是由杂交瘤细胞株2C4分泌产生的；所述杂交瘤细胞株2C4，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.7109。

所述抗β-伴大豆球蛋白的单克隆抗体可用于检测或辅助检测β-伴大豆球蛋白。

所述杂交瘤细胞株2C4或所述抗β-伴大豆球蛋白的单克隆抗体可用于制备检测或辅助检测β-伴大豆球蛋白的试剂或试剂盒。

本发明还提供了一种检测或辅助检测β-伴大豆球蛋白的试剂盒，该试剂盒中含有独立包装的所述抗β-伴大豆球蛋白的单克隆抗体。

所述试剂盒中还可含有独立包装的如下1）—9）试剂中的至少一种：

1）包被缓冲液：溶剂为水，溶质为Na₂HPO₄和NaH₂PO₄，所述溶质Na₂HPO₄和NaH₂PO₄在所述包被缓冲液中的浓度分别为2.3g/L和0.45g/L，pH值为7.4；

2）封闭液：溶剂为水，溶质为牛血清白蛋白（BSA）、小牛血清、吐温-20和蔗糖，所述溶质BSA、小牛血清、吐温-20和蔗糖在所述封闭液中的浓度分别为10g/L、100ml/L、0.5ml/L和100g/L；

3）PBS缓冲液：溶剂为水，溶质为NaCl、KCl、KH₂PO₄和Na₂HPO₄，所述溶质NaCl、KCl、KH₂PO₄和Na₂HPO₄在所述PBS缓冲液中的浓度为8g/L、0.2g/L、0.2g/L和0.46g/L，pH值为7.4；

4）洗涤液：溶剂为所述PBS缓冲液，溶质为吐温-20，所述溶质吐温-20在所述洗涤液中的浓度为50ml/L；

5）抗体稀释液：溶剂为所述PBS缓冲液，溶质为吐温-20和明胶，所述溶质吐温20和明胶在所述抗体稀释液中的浓度分别为10ml/L和0.01M；

6）终止液：2M的硫酸水溶液；

7）底物液A和底物液B；

所述底物液A：溶剂为水，溶质为过氧化氢脲、Na₂HPO₄、柠檬酸和吐温-20，所述过氧化氢脲、Na₂HPO₄、柠檬酸和吐温-20在所述底物液A浓度分别为1g/L、14.2g/L、9.42g/L和0.1ml/L；

所述底物液B：溶剂为水，溶质为四甲基联苯胺、柠檬酸和硫代硫酸钠，所述四甲基联苯胺、柠檬酸和硫代硫酸钠在所述底物液B中的浓度分别为0.4g/L、1.83g/L和0.1g/L；

8）30×样品提取液：溶剂为水，溶质为Tris、HCl和β-巯基乙醇，所述Tris、HCl和β-巯基乙醇在所述30×样品提取液中的浓度分别为Tris181.7mg/L、73ml/L、21ml/L。