[发明专利]烟草及烟草制品中三种酰胺类除草剂的高效液相色谱-串联质谱测定方法

说明书

技术领域

本发明属于烟草及烟草制品中农药残留的理化检验技术领域，主要涉及烟草及烟草制品中酰胺类除草剂残留量的测定技术，具体说是用乙腈对样品进行浸提，再加入无水硫酸镁与氯化钠等振荡促使其分层，随后进行分散固相萃取，以液相色谱-串联质谱直接测定烟草及烟草制品中三种酰胺类除草剂残留量的方法。 

背景技术

酰胺类除草剂是 20世纪 60年代开发的一类高效、高选择性的触杀型除草剂。它对多种禾本科双子叶植物具有强烈的杀毒作用, 主要用于防除一年生禾本科杂草幼芽。大鼠体内试验表明, 酰胺类除草剂可进一步转化成有致癌作用的二烷基醌亚胺, 因此其残留情况受到广泛关注。文献报道有关此类除草剂残留检测分析较多, 主要有气相色谱-氮磷检测器(GC-NPD)法、气相色谱-电子捕获检测器 (GC-ECD)法、气相色谱-质谱法、高效液相色谱法等。YC/T 179-2004【中华人民共和国烟草行业标准YC/T 179-2004 烟草及烟草制品 酰胺类除草剂农药残留量的测定】使用 GC-NPD检测, 目前 NPD是检测氮磷化合物灵敏度较高的检测器, 而 NPD对含氮化合物的响应与其分子结构有关, 对胺类特别是酰胺类响应小。烟叶含氮物质极多, 很难完全净化干净, 容易造成假阳性。而且 NPD存在随使用时间增长性能变差的缺点, 影响检测的准确性。师君丽等【分析实验室，烟草中酰胺类除草剂残留的GC-MS检测，29增刊：2010，5】将烟草样品用乙腈提取，弗罗里硅土固相萃取柱净化，然后利用GC-MS检测了烟草中的异丙甲草胺、草乃敌和敌草胺三种除草剂。但是该方法需要消耗大量溶剂，而且该方法操作繁琐，费时。LC-MS/MS具有较高的灵敏度和较强的专属性，不需要使分析物之间实现完全的色谱分离，使得样品预处理过程简化，同时分析测试时间大为缩短。可以实现对多类型多残留的同时分析。 

发明内容：

本发明的目的旨在克服现有技术缺陷，提供一种采用基质分散固相萃取-液相色谱-串联质谱测定烟草及烟草制品中酰胺类除草剂残留量的测定方法，该方法能快速、准确检测烟草及烟草制品中酰胺类除草剂残留量，测定结果准确、测定干扰少。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：烟草及烟草制品中三种酰胺类（即甲草胺、异丙甲草胺和敌草胺）除草剂的高效液相色谱-串联质谱测定方法，是通过基质分散固相萃取法萃取除草剂农药残留，以液相色谱-串联质谱直接测定烟草及烟草制品中的农药残留量，具体方法如下： 

a、样品的提取：准确称取2 g样品（精确至0.01 g）于50 mL具盖离心管中，加入10 mL水，振荡直至样品被水充分浸润。静置10 min后移取10 mL乙腈和50μL内标至离心管中，然后将离心管置于涡漩混合振荡仪上，以2000 rpm 速率振荡1 min。将离心管置于0 ℃条件下保持10 min，然后向离心管中加入Agilent SampliQ QuEChERS EN萃取试剂盒(Agilent 5982-5650)，立即于漩涡混合振荡仪上，以2000 rpm速率振荡2 min，然后以4000 rpm速率离心10 min；

b、样品净化：移取上清液1.0 mL于1.5 mL离心管中，加入Agilent QuEChERS 2 mL 分散固相萃取试剂盒（Agilent 5982-5321），于漩涡混合振荡仪上以2000 rpm速率振荡2 min，以6000 rpm 速率离心2 min。吸取上清液经0.22μm有机相滤膜过滤，移取200μL，用乙腈稀释至1.0 mL，用LC-MS/MS检测；

c、内标溶液的配制：由于氯唑磷已不在烟草中使用了,所以用氯唑磷做内标。配制氯唑磷浓度约为20μg/mL的甲醇溶液；

d、基质混合标准工作溶液制备：配制具有浓度梯度的且含有内标的基质混合标准工作溶液； 

e、液相色谱-串联质谱测定:吸取以上配制好的不同浓度的基质混合标准工作溶液，注入液相色谱-串联质谱仪；

f、农药残留量测定结果的计算

以内标法进行残留量的定量分析，即以农药和内标的定量离子对峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，相关系数大于等于0.999,对提取后的样品进行测定，测得检出农药和内标的定量离子对峰面积比，代入标准曲线，求得样品中的各种农药的残留量。