[发明专利]烟草及烟草制品中三种酰胺类除草剂的高效液相色谱-串联质谱测定方法

权利要求书

1.一种烟草及烟草制品中三种酰胺类除草剂的高效液相色谱-串联质谱测定方法，即甲草胺、异丙甲草胺和敌草胺三种除草剂，其特征在于：该方法是通过基质分散固相萃取法萃取除草剂农药残留，以液相色谱-串联质谱直接测定烟草及烟草制品中的农药残留量，具体方法如下：

a、样品的提取：准确称取2 g样品（精确至0.01 g）于50 mL具盖离心管中，加入10 mL水，振荡直至样品被水充分浸润；静置10 min后移取10 mL乙腈和50μL内标至离心管中，然后将离心管置于涡漩混合振荡仪上，以2000 rpm 速率振荡1 min；

将离心管置于0 ℃条件下保持10 min，然后向离心管中加入Agilent SampliQ QuEChERS EN萃取试剂盒，立即于漩涡混合振荡仪上，以2000 rpm速率振荡2 min，然后以4000 rpm速率离心10 min；

b、样品净化：移取上清液1.0 mL于1.5 mL离心管中，加入Agilent QuEChERS 2 mL 分散固相萃取试剂盒，于漩涡混合振荡仪上以2000 rpm速率振荡2 min，以6000 rpm 速率离心2 min；吸取上清液经0.22μm有机相滤膜过滤，移取200 μL，用乙腈稀释至1.0 mL，用LC-MS/MS检测；

c、内标溶液的配制：用氯唑磷或是丙草丹做内标，配制氯唑磷浓度约为20 μg/mL的甲醇溶液；

d、基质混合标准工作溶液制备：配制具有浓度梯度的且含有内标的基质混合标准工作溶液； 

e、液相色谱-串联质谱测定:吸取以上配制好的不同浓度的基质混合标准工作溶液，注入液相色谱-串联质谱仪；

f、农药残留量测定结果的计算

以内标法进行残留量的定量分析，即以农药和内标的定量离子对峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，相关系数大于等于0.999,对提取后的样品进行测定，测得检出农药和内标的定量离子对峰面积比，代入标准曲线，求得样品中的各种农药的残留量。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：标准工作溶液制备具体如下：分别称取10 mg三种农药标准品于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，配制成每种农药的单一标准储备液；移取一定量各农药的单一标准储备液于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度配得混合标准储备液；分别移取混合标准储备液25μL,50μL,100μL,250μL,500μL及1000μL到6个10 mL容量瓶中，并加入50μL内标用乙腈定容，制得标准工作溶液；然后分别移取上述标准工作溶液200μL与200μL的空白样品提取溶液混合，并用乙腈稀释至1.0 mL，配制成基质混合标准工作溶液。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：采用的液相色谱条件为：色谱柱：Atiantis dC18 (150 mm×2.1 mm，3μm, 美国Waters公司)；流动相：乙腈-水（0.1 %甲酸)，梯度洗脱；流速：0.2 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10μL；采用的质谱条件：扫描方式：正离子扫描; 电喷雾离子源(ESI); 雾化气流量为60 psi; 气帘气流量18 psi; 辅助加热气流量为60 psi; 离子化温度500 ℃; 碰撞气流量为10 psi; 4种气体均为氮气; 停留时间为100 msec; 电离电压5500 V, MRM模式采集。