[发明专利]一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种应用生物工程技术从甘蔗渣中分离纯化甘蔗渣多糖的方法。

背景技术

甘蔗渣是制糖工业的主要副产品，是甘蔗机械压制后所剩的主要部分，属于农业固体废弃物中的一种，我国有多个省份种植甘蔗，海南、广东、广西、福建、云南都是我国重要的产糖省份，每年均有大量的甘蔗渣产生，多数没有得到有效的高值化利用，有的甚至弃于路边，造成环境污染。寻找高值化的途径综合利用甘蔗渣具有重要意义。多糖是由十几个甚至上千个单糖分子缩合、失水而成，是一类分子机构复杂且庞大的糖类物质，近年来受到了越来越广泛的关注，研究表明多糖具有极其广泛的生物活性。

多糖的提取多采用水提醇沉法，亦有采用超声提取多糖的方法（专利：一种从甘蔗渣中提取多糖的方法CN101171956）。研究表明甘蔗渣中提取的多糖具有免疫增强、抗肿瘤、抗病毒、降血糖、降血脂的作用。由于多糖成分复杂，所以其组分的分离和纯化对于多糖的利用具有至关重要的作用，对进一步的化学结构研究和药理机制的阐明具有重要意义。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的是提供一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，其不影响多糖天然的结构，保留了其生物活性。

本发明的目的是这样实现的：一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）脱脂：取甘蔗渣以乙醇浸泡、回流，滤过后滤渣烘干；

（2）提取：步骤（1）所得滤渣经水提醇沉法得粗多糖；

（3）脱蛋白：步骤（2）所得粗多糖用水溶解，通过sevag法将蛋白分离；

（4）透析：步骤（3）所得的粗品浓缩，离心，将上清液在水中透析，去除小分子杂质，收集甘蔗渣多糖溶液；

（5）冷冻干燥：步骤（4）所得甘蔗渣多糖浓缩后冷冻干燥，得甘蔗渣多糖干品；

（6）纯化：将步骤（5）所得甘蔗渣多糖经离子交换色谱法与凝胶色谱法纯化；

（7）冷冻干燥，得到甘蔗渣多糖纯品粉末。

本发明是从甘蔗渣中通过热水提取有生物活性的粗多糖、脱蛋白、除盐、柱层析纯化和冷冻干燥，建立了多糖的分离纯化工艺，获取均一分子量的多糖，具有免疫调节和降血脂活性，对进一步研究其化学结构和阐明其药理活性机制有重要意义，本发明采用的离子交换色谱柱具有开放性的骨架，多糖能自由进入载体中并进行迅速扩散，有较大的表面积，对多糖的吸附量较离子交换树脂大许多，本发明通过离子交换色谱法与凝胶色谱法结合对多糖进行深化分离以得到精多糖。

附图说明

图1是本发明实施例1中经DEAE-52纤维素柱层析分离出2个组分的图谱；

图2是本发明实施例1中第1组分Sephadex G-100凝胶层析图谱；

图3是本发明实施例1中第2组分Sephadex G-100凝胶层析图谱；

图4是本发明实施例1中第1组分Sephacryl S-300凝胶层析图谱；

图5是本发明实施例1中第2组分Sephacryl S-300凝胶层析图谱。

具体实施方式

本发明是一种甘蔗渣多糖分离纯化的方法，包括以下步骤：

（1）脱脂：取甘蔗渣以乙醇浸泡、回流，滤过后滤渣烘干。优选的，取一定量的甘蔗渣，加入6-12倍量95%乙醇浸泡30-60min，回流4-8h，滤过，滤渣烘干。

（2）提取：步骤（1）所得滤渣经水提醇沉法得粗多糖。优选的，水提醇沉法是：将步骤（1）所得滤渣依次加8-12倍量、6-10倍量水回流提取一次以上，每次2-4h，滤过合并滤液，滤液浓缩，加3-5倍量95%乙醇，静置，抽滤，滤渣经干燥得粗多糖。

（3）脱蛋白：步骤（2）所得粗多糖用水溶解，通过sevag法将蛋白分离。优选的，sevag法是：将步骤（2）所得甘蔗渣粗多糖用水溶解，将氯仿按多糖溶液1/5体积加入，随之加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合剧烈振摇搅拌后，以2000-6000rpm，10-30min离心，出去蛋白，如此重复7-10次。

（4）透析：步骤（3）所得的粗品浓缩，离心，将上清液在水中透析，去除小分子杂质，收集甘蔗渣多糖溶液。优选的，透析是：步骤（3）所得的粗品浓缩，离心，得上清液，用截留分子量3000的透析袋将上清液在流水中透析40-55h，再在去离子水中透析20-30h，收集甘蔗渣多糖溶液。

（5）冷冻干燥：步骤（4）所得甘蔗渣多糖浓缩后冷冻干燥，得甘蔗渣多糖干品。