[发明专利]同时检测三种腹泻原虫的试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检测技术领域，尤其涉及一种同时检测三种腹泻原虫的试剂盒及检测方法。

背景技术

腹泻是一种常见的多发性疾病，其病因有很多种，以细菌性感染最为多见，同时，原虫腹泻也比较常见。通常指的原虫腹泻，主要是指寄生于肠道或邻近脏器内，以腹泻及相关症状为其或某一阶段主要临床表现的寄生虫病。腹泻可能由于寄生虫（原虫）损害肠壁组织引起，其中有的虫种主要损害肠微绒毛及绒毛，有的则造成肠壁的炎症及溃疡，周围形成明显的细胞浸润反应。引起腹泻的原虫主要有：溶组织内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫、毛首鞭形线虫、日本血吸虫、隐孢子虫、结肠小袋纤毛虫等。其中溶组织内阿米巴、隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫都能寄生在人体肠道内，可以引起患者腹泻。

溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica Schaudinn)属内阿米巴科的内阿米巴属，其可引起阿米巴病。

蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia Stiles）简称贾第虫。寄生人体小肠、胆囊主要在十二指肠，可引起腹痛、腹泻和吸收不良等症状，致贾第虫病（giardiasis），为人体肠道感染的常见寄生虫之一。

隐孢子虫（Cryptosporidium）是营寄生生活的单细胞原虫，其属于原生动物界。迄今报道过的隐孢子虫虫种有：微小隐孢子虫（C．parvum），小鼠隐孢子虫（C．muris），火鸡隐孢子虫（C．meleagridis），蛇隐孢子虫（C．serpentis），鱼隐孢子虫（C．nasorum）等，其中对人和大多数脊椎动物造成感染的主要是微小隐孢子虫（C．p．）。微小隐孢子虫是一种重要的呈世界性分布的机会性致病原虫，可引起人畜共患的隐孢子虫病。

由于上述三种寄生虫（原虫）对人类存在危害，因此有必要对其采取预防性措施，即通过检测它们的存在来防止其引发人体的腹泻。而现有技术中通常采用传统的染色方法对这些原虫进行鉴定，这些染色法操作繁琐，且需要对三种寄生虫（原虫）分别进行检测，因此延长了检测周期。

发明内容

针对以上问题，本发明实施例提供一种同时检测三种腹泻原虫（即溶组织内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫、隐孢子虫）的PCR检测试剂盒，旨在解决现有技术中检测针对性单一，检测周期长的问题。

本发明实施例是这样实现的，一种PCR检测试剂，包含PCR反应液、DNA聚合酶，还包括以下引物和探针：

针对溶组织内阿米巴的引物和探针：

正向引物：5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAACAGTTTATTGTCATCAAGCATGGTG-3’SEQ ID NO:1，

反向引物：5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAAACTATTCTGATTGTTTCTTCCGTTG-3’SEQ ID NO:2，

探针：5’-CGGGGAGGAGGAGTAGGAAAGTTGACATTCCCCG-3’SEQ ID NO:3；

针对蓝氏贾第鞭毛虫的引物和探针：

正向引物：5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAAACGGCTCAGGACAACGGTT-3’SEQ ID NO:4，

反向引物：5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAAGTCTTGGCGCCGGGTT-3’SEQ ID NO:5，

探针：5’-CCAGCGTGCTAGCCGGACACCGCTGG-3’SEQ ID NO:6；

针对隐孢子虫的引物和探针：

正向引物：5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAATGGTGGGCATTCCTTTGC-3’SEQ ID NO:7，

反向引物：5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAACCGTTTGTCCTTCTGGTTTTG-3’SEQ ID NO:8，

探针：5’-CGGTGGCTGAATTAGAATCGACATGCCCACCG-3’SEQ ID NO:9；

其中各条探针序列5’端连接有荧光基团，3’端连接有淬灭基团；

该检测试剂还包括如下Homo-tag：

5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAA-3’SEQ ID NO:10。

本发明实施例的另一目的在于提供一种PCR检测试剂盒，该PCR检测试剂盒包含本发明提供的PCR检测试剂。