[发明专利]基于弓形虫缓殖子抗原的CD8+T细胞优势表位

说明书

技术领域

本发明涉及基于弓形虫缓殖子抗原的CD8⁺T细胞优势表位。

背景技术

弓形虫(Toxoplasmagondii)是世界性分布的寄生原虫，广泛寄生于人体及动物的有核细胞内，可对人类健康造成很大临床损害并可造成畜牧业上巨大的经济损失。对弓形虫病的治疗，迄今为止尚未发现理想的防治药物。而表位疫苗因其易合成，研制简单、安全，近年来成为弓形虫疫苗的研究热点。抗原表位是蛋白质抗原表面的抗原决定簇，是决定抗原特异性的特殊化学基团。抗原通过抗原表位与相应的淋巴细胞表面的抗原受体结合，从而激活淋巴细胞，引起免疫应答；抗原也借表位与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合而发挥免疫效应。弓形虫作为专性细胞内寄生虫，其表面抗原被降解成（8-12aa）长度的氨基酸片段，被呈现给MHC-I类分子的细胞，CD8⁺T细胞识别的MHC-I类分子和肽的复合体，通过刺激CD8⁺T细胞分泌IFN-γ来杀死感染弓形虫的细胞。在这项研究中，我们在SAG2C，-2D，和SAG2X蛋白质中筛选出6个具有高亲和性的CD8⁺T细胞表位，其中，两个抗原表位肽显示有很好的免疫原性，能够刺激脾细胞增殖，诱导小鼠分泌保护性细胞因子，产生有效免疫保护性。

发明内容

针对上述现有技术，本发明筛选出了两个基于弓形虫缓殖子SAG2C，SAG2D和SAG2X抗原的CD8⁺T细胞抗原的优势表位：经证明具有很强的刺激T细胞增殖的能力和免疫保护性，可作为有效抗弓形虫感染的表位疫苗。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一个基于弓形虫缓殖子抗原的CD8⁺T细胞抗原的优势表位：是氨基酸序列为VPNSSLVEN的抗原肽，如SEQIDNO.1所示。

另一个基于弓形虫缓殖子抗原的CD8⁺T细胞抗原的优势表位：是氨基酸序列为SQFLSLSLL的抗原肽，如SEQIDNO.4所示。

本申请的发明人分析弓形虫缓殖子SAG2CDX蛋白质氨基酸的序列，筛选出6个具有H-2限制性，高亲和性的CD8⁺T细胞表位（表1）；人工合成多肽，将多肽在PBS中溶解后混合免疫BALB/c小鼠，在小鼠尾巴根部，注射100ul多肽混合液，其中每种肽含量为100ug。免疫2次，间隔3周。于免疫后4周，无菌条件下取脾，进行脾细胞增殖水平和细胞因子含量测定以及表位疫苗的免疫保护性评估。结果表明，由表位疫苗诱导小鼠可产生强有力的细胞免疫。其中两个抗原肽：VPNSSLVEN和SQFLSLSLL，显示具有良好的刺激T细胞增殖的能力。这些筛选出的表位可以作为表位疫苗设计中很好的候选表位，降低宿主脑组织中包囊形成率。

本发明的基于弓形虫缓殖子抗原的CD8⁺T细胞抗原优势表位疫苗，具体应用时，可以添加医学上常规的疫苗佐剂进行表位疫苗的设计。

附图说明

图1：表位肽疫苗诱导的细胞增殖试验。在免疫后4周，收集小鼠的脾细胞，来评估脾细胞对表位疫苗的增殖免疫应答。结果显示，淋巴细胞增殖反应在用PBS处理的小鼠中无明显差异。在这六个表位肽中，VPNSSLVEN和SQFLSLSLL显示高的OD吸光度值，证明有较好的能力来刺激脾细胞产生强烈的淋巴细胞反应。

图2：免疫鼠CD8⁺T细胞分泌IFN-γ的水平，其中，A：PBS对照组；B：表位混合免疫组。免疫鼠脾细胞细胞表面分子CD8及胞内细胞因子IFN-γ染色。B1，B2为IFN-γ染色阳性的细胞比例。B2，B4为CD8⁺染色阳性的细胞比例。B2为IFN-γ和CD8⁺双染阳性细胞的比例。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1筛选优势表位，免疫BALB/c小鼠