[发明专利]双液相系统发酵法降解植物甾醇制备雄烯二酮

权利要求书

1.本发明涉及一种利用微生物发酵降解植物甾醇制备雄烯二酮(雄甾-4-烯-3，17-双酮，简称AD)的方法，其具体步骤如下：发酵菌种接种至双液相培养基中，保持一定的温度，加入植物甾醇，搅拌、控制pH值，发酵完成后，采用膜分离技术获得含AD溶液，后经浓缩、活性炭脱色、过滤、浓缩、重结晶、真空干燥得到AD晶体，纯度达到99％以上。

2.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵降解植物甾醇制备雄烯二酮，其特征在于发酵菌种为分枝杆菌(Mycobacterium sp.)DE6823，其菌种保藏编号为CGMCC No.6419。

3.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵降解植物甾醇制备雄烯二酮，其特征在于双液相指的是水相和油相；水相具体为灭菌蒸馏水，油相具体可是米糠油、葵花油、大豆油和花生油。

4.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵降解植物甾醇制备雄烯二酮，其特征在于菌种的接入量为8％～17％。

5.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵降解植物甾醇制备雄烯二酮，其特征在于培养基配方如下：玉米淀粉4～17％(g/L)，NH₄NO₃ 0.1～0.4％(g/L)，K₂HPO₃ 0.1～0.2％(g/L)，航空煤油0.1～0.5％(g/L)，消泡剂0.002～0.009％(g/L)，油相的浓度为14～26g/L，植物甾醇的添加浓度维持15～22g/L，其余为灭菌蒸馏水。

6.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵降解植物甾醇制备雄烯二酮，其特征在于保持一定温度为30℃～32℃。

7.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵降解植物甾醇制备雄烯二酮，其特征在于搅拌速度为130～300r/min；pH值范围为8.2～8.4。

8.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵降解植物甾醇制备雄烯二酮，其特征在于有机溶剂指的是烷基醇和烷基酮，具体包括乙醇、甲醇、异丁醇、丙酮。

9.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵降解植物甾醇制备雄烯二酮，其特征在于发酵结束后，过滤，滤去发酵液中的固体，加入少量的无机盐，取油相，加入权利要求8所述溶剂，充分搅拌后，通过膜过滤，浓缩，在浓缩液中加入活性炭，回流10～20min，过滤、滤液旋蒸得到AD粗品。

10.根据权利要求9所述的一种利用微生物发酵降解植物甾醇制备雄烯二酮，其特征在于无机盐指的是NaCl、K₂CO₃和Na₂CO₃。