[发明专利]一种小分子量方格星虫纤溶酶及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种方格星虫纤溶酶，为具有如下1）或2）特征的纤溶酶：1）其分子量为20KDa-25KDa；2）等电点为3.0-3.5。

2.根据权利要求1所述的方格星虫纤溶酶，其特征在于：所述方格星虫纤溶酶，为具有如下1）或2）特征的纤溶酶：1）其分子量为24917Da；2）等电点为3.211。

3.一种制备权利要求1或2所述方格星虫纤溶酶的方法，包括如下步骤：

1）将离体的方格星虫内脏依次进行匀浆、盐析，收集盐析产物；

2）将所述盐析产物依次经离子交换柱层析和凝胶柱层析，得到方格星虫纤溶酶。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述离子交换柱层析为阴离子交换柱层析；

所述阴离子交换柱层析为将所述盐析产物流经阴离子交换柱，用含0.1-1M NaCl的浓度为0.02M、pH值为7.8的Tris-HCl缓冲液进行线性梯度洗脱，检测阴离子交换柱洗脱产物活性，收集具有活性的阴离子交换柱层析洗脱产物；所述线性洗脱的时间为20h，所述线性洗脱的流速为0.5mL/min；

所述凝胶柱层析为将所述阴离子交换柱洗脱产物流经葡聚糖凝胶柱，用浓度为0.02M、pH值为7.5的PBS缓冲液洗脱，检测葡聚糖凝胶柱洗脱产物活性，收集具有活性的凝胶柱层析洗脱产物；所述洗脱的时间为6h，所述洗脱的流速为1mL/min；

所述检测洗脱产物活性采用的方法具体为纤维素蛋白平板检测。

5.根据权利要求4所述的方法，包括如下步骤：

所述阴离子交换柱为DEAE-Sepharose FF；

所述葡聚糖凝胶柱为Sephadex G-50。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：

步骤2）中，在所述离子交换柱层析步骤前，还包括将所述盐析产物透析除盐的步骤；

在所述阴离子交换柱层析中，在所述检测阴离子交换柱洗脱产物活性的步骤前还包括：将线性梯度洗脱的产物透析除盐的步骤；

在所述凝胶柱层析中，在收集具有活性的凝胶柱层析洗脱产物的步骤后还包括：将所述具有活性的凝胶柱层析洗脱产物透析除盐、干燥，得到方格星虫纤溶酶的步骤；

所述透析具体采用截留分子量为10kDa的透析袋。

7.根据权利要求3－6中任一所述的方法，其特征在于：

步骤1），所述匀浆为将所述方格星虫的内脏与pH为7.5、浓度为0.02mol/L的磷酸缓冲液混匀后匀浆，离心收集上清液A；

所述盐析包括如下步骤：

A、向所述上清液A加入硫酸铵至质量百分含量为30%，混匀、静置、离心收集上清液B；

B、向所述上清液B中加入硫酸铵至质量百分含量为70%，混匀、静置、离心，收集沉淀，得到盐析产物。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：

所述方格星虫的内脏与所述磷酸缓冲液的配比为250g：1L；

所述匀浆在0-4℃条件下进行；所述匀浆具体在0℃条件下进行；

所述静置均为4-10℃静置2-8h，所述静置均具体为4℃静置2h；

所述离心均为在4-10℃、离心力为4000-8000g下离心10-30min；所述离心均具体为在4℃、离心力为5000g下离心10min。

9.由权利要求3-8任一所述的方法制备得到的方格星虫纤溶酶：所述方格星虫纤溶酶分子量具体为24917Da、等电点具体为3.211。

10.权利要求1或2或9所述的方格星虫纤溶酶在降解纤维蛋白原中的应用。