[发明专利]一种H7亚型禽流感病毒单克隆抗体及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术，涉及一种H7亚型禽流感病毒单克隆抗体及试剂盒。

背景技术

禽流行性感冒（Avian Influenza，AI）简称禽流感，是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类传染病。禽流感病毒（Avian Influenza virus，AIV）可感染几乎所有野禽及家禽，根据AIV致病力的不同，可将其分为高致病性、低致病性和无致病性AIV。近年来，禽流感在世界范围流行，给养禽业造成巨大的经济损失。禽流感病毒极易变异，可跨种传播感染人类，成为威胁人类健康的重要病原之一。1997年香港、2003年荷兰、2004年以来东南亚都出现了人感染高致病性禽流感而死亡的病例。高致病性禽流感（Hihgly Pathogenic Avian Influenza，HPAI）被世界动物卫生组织（OIE）列为法定报告疫病，我国也将其列为一类动物疫病。

2009年3至4月，墨西哥爆发H1N1疫情，导致过百人感染，其后疫情迅速传播到全世界。2009年4月30日凌晨，世界卫生组织把全球流感大流行警告级别提高到第5级。2009年6月11日，世界卫生组织将全球流感大流行警告级别提升至最高等级第6级。此次H1N1流感在世界范围内的大流行给全球造成了极大恐慌，影响了全球的正常经济、贸易秩序，也给公共卫生安全造成极大威胁。尽管我国目前流行的高致病性禽流感主要是H5亚型，但在我国河北等地已经分离到H7亚型禽流感病毒，与我国相邻的朝鲜还出现了H7亚型禽流感流行。所以我国有必要开展H7亚型禽流感病毒的流行病学检测、诊断与防控工作。因此建立检测H7亚型高致病性禽流感，以及H7亚型流感病毒的快速、亚型特异性检测试剂盒有利于该病的防控，也有助于消除该病对人类健康的威胁。

通常情况下，高致病性禽流感的诊断可以根据临床症状、大体剖检等作出初步诊断，具体可参考国家颁布的《高致病性禽流感防治技术规范》。确诊和分型则需要进行实验室诊断，包括：病原的分离与鉴定、血清学诊断。但是高致病性禽流感需要在生物安全3级实验室才能操作，操作人员必须经过专业的训练。因此分离和鉴定H7亚型禽流感病毒需要专业的实验器材、操作技术，而且需要较长的时间，因此该方法的应用受到极大的限制。随着分子生物学的发展与应用，运用分子生物学技术进行高致病性禽流感检测的方法越来越多，尤其是基于聚合酶链式反应（PCR）的反转录（RT-）PCR，实时荧光RT-PCR。但是该方法需要昂贵且专业的仪器设备，尤其是实时荧光RT-PCR，所用耗材也价格不菲，同时需要经过专业培训的人员才能胜任操作，而且容易出现由于样品污染而造成假阳性。HI试验结果可靠性高，是WHO进行全球流感监测采用的方法，应用已知亚型的标准抗血清，可以进行亚型鉴定，但该方法的缺点是需要除去普遍存在于血清中的非特异凝集素，同时需要在每次实验时进行抗原标准化，并需要比较专业的正确判读的技能，因此该方法也仅能在相关的专业人员中应用，不适于普及推广。而基于抗体的捕获ELISA、胶体金试纸条、间接免疫荧光技术、免疫组化等方法可以快速、灵敏地检测H7亚型禽流感，适于在大规模的监测系统中应用和现地检测。而捕获ELISA、胶体金试纸条、间接免疫荧光技术、免疫组化等方法的应用依赖于针对H7亚型禽流感抗原的特异性单克隆抗体的研制。

但目前为止，尚未有见灵敏度好、特异性强、效价高的H7亚型禽流感病毒的单克隆抗体和相应检测试剂盒的报道。

发明内容

根据上述领域的需求和不足，本发明提供一种灵敏度好、特异性强、效价高的H7亚型禽流感病毒的单克隆抗体，本发明单克隆抗体可以应用于检测H7亚型禽流感病毒或H7亚型禽流感病毒抗体。

一种杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No.7308，所述杂交瘤细胞株的获得是通过将H7N2禽流感病毒接种在9日龄受精SPF鸡胚上，得到扩增后的H7N2株病毒，取活H7N2禽流感病毒灭活，用灭活H7N2禽流感病毒液制备H7N2禽流感病毒抗原纯化液，免疫小鼠后，取免疫小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合，后对上述细胞进行培养，进一步亚克隆，筛选出一株针对H7亚型禽流感病毒的单克隆抗体，及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞，纯化并保藏。

一种H7亚型禽流感病毒单克隆抗体，由上述杂交瘤细胞株分泌而得，该单克隆抗体能特异性的结合H7亚型禽流感病毒血凝素（HA）蛋白。

上述的单克隆抗体在检测H7亚型禽流感病毒或H7亚型禽流感病毒抗体中的应用。

一种用于检测H7亚型禽流感病毒的反应载体，其特征在于，所述反应载体直接或间接包被有上述单克隆抗体。