[发明专利]多价肺炎球菌荚膜多糖-蛋白质共轭组合物及其制备方法

权利要求书

1.多价肺炎球菌荚膜多糖-蛋白质共轭组合物，其特征在于，其是包括14种不同血清型肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）荚膜多糖和载体蛋白质共价连接形成的共轭组合物；其中，所述14种不同血清型包括1、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F和33F。

2.根据权利要求1所述的共轭组合物，其特征在于，其是由14种不同血清型肺炎链球菌荚膜多糖和载体蛋白质共价连接形成的共轭组合物；其中，所述14种不同血清型为1、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F和33F。

3.根据权利要求1所述的共轭组合物，其特征在于，荚膜多糖与载体蛋白质的重量比为1:2-2:1，各血清型荚膜多糖的质量为血清型1：血清型4：血清型5：血清型6A：血清型7F：血清型9V：血清型14：血清型18C：血清型19A：血清型19F：血清型22F：血清型23F：血清型33F：血清型6B=1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:1:2。

4.根据权利要求1所述的共轭组合物，其特征在于，所述载体蛋白质为白喉类毒素或破伤风类毒素。

5.根据权利要求4所述的共轭组合物，其特征在于，所述载体蛋白质为白喉类毒素CRM197。

6.制备权利要求1-5任一项所述共轭组合物的方法，其特征在于，分别对14种不同血清型肺炎链球菌的荚膜多糖进行分离纯化，然后将各血清型荚膜多糖分别与载体蛋白质进行共价连接，形成单价共轭物，最后将各型单价共轭物混合，即得多价肺炎球菌荚膜多糖-蛋白质共轭组合物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，肺炎链球菌荚膜多糖分离纯化的步骤为：

1）建立肺炎球菌菌种库，采用工作种子进行肺炎球菌发酵；

2）向肺炎球菌发酵液中加入适量的去氧胆酸钠进行杀菌并剥离肺炎荚膜多糖；

3）对杀菌后的发酵液进行离心，去除菌体，收集离心上清，然后进行超滤浓缩；

4）向浓缩液中加入无水乙醇，使乙醇终浓度为25%～45%，搅拌后离心去除核酸；

5）向上清中加入乙醇使其终浓度达到55%～80%，搅拌后，离心，去除上清收集沉淀；

6）加水溶解沉淀，加入1-3倍溶液体积的苯酚进行抽提，去除蛋白；

7）向上清中加入乙醇，使其终浓度达到55%～80%，离心后收集沉淀，即得纯化的肺炎球菌荚膜多糖。

8.权利要求1-5任一项所述共轭组合物在制备用于预防或治疗肺炎链球菌所致疾病的药物中的应用。

9.多价肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗，其含有权利要求1-5任一项所述的共轭组合物，以及赋形剂和/或任选基于铝的佐剂；其中，基于铝的佐剂其终浓度为0.25-1.0mg/mL。

10.根据权利要求9所述的结合疫苗，其特征在于，其为喷雾剂、注射剂、冻干剂、胶囊剂、片剂或丸剂。