[发明专利]结晶化的草酸脱羧酶和使用方法

说明书

公开了草酸脱羧酶晶体，包括稳定化的晶体，例如交联的草酸脱羧酶晶体。也公开了使用草酸脱羧酶晶体治疗与升高的草酸盐浓度有关的病症的方法。另外，公开了制备蛋白晶体的方法。

本申请是中国专利申请号200780035792.4（PCT/US2007/075091），申请日2007年8月2日，发明名称为“结晶化的草酸脱羧酶和使用方法”的分案申请

相关申请的交叉参考

本申请要求2006年8月2日提交的美国申请系列号60/834,933和2006年10月26日提交的美国申请系列号60/854,540的优先权，它们的内容通过参考整体并入本文。

背景技术

草酸是式HO2C-CO2H的二羧酸。草酸主要作为草酸盐存在于生物体中，所述草酸盐是草酸的盐形式。草酸盐见于食物中，例如，菠菜,大黄,草莓,酸果蔓,坚果,可可,巧克力,花生酱,高粱,和茶叶。草酸盐在人类和其它哺乳动物中也是代谢终产物。它由肾排泄进尿中。当与钙结合时，草酸生成不溶的产物草酸钙，它是在肾结石中发现的最普遍的化合物。

因为哺乳动物不会合成降解草酸盐的酶，个体中的草酸盐水平一般通过排泄和饮食草酸盐的低吸收来维持正常。高浓度的草酸盐与多种病理有关，例如原发性高草酸尿症,肠原性高草酸尿症和特发性高草酸尿症。Leumann等人,Nephrol.Dial.Transplant.14:2556-2558(1999)和Earnest,Adv.Internal Medicine24:407-427(1979)。增加的草酸盐的原因可以是，从食物摄入过多的草酸盐，从肠道过多吸收草酸盐，和草酸盐生成的异常。草酸盐在结肠和小肠中的吸收过多与肠病有关，包括由胆汁酸和脂肪吸收不良疾病造成的吸收过多；回肠切除;和例如，由乳糜泻导致的脂肪泻、外分泌胰腺机能不全、肠病和肝病。

高草酸尿或增加的尿草酸盐排泄与许多涉及草酸钙在肾组织(肾钙 沉着症)或尿道(例如，肾结石（kidney stones）,尿路结石症,和肾结石（nephrolithiasis）)中的沉积的健康问题有关。草酸钙也可以沉积在例如眼睛、血管、关节、骨、肌肉、心脏和其它重要器官，对它们造成损害。参见，例如，Leumann等人,J.Am.Soc.Nephrol.12:1986 1993(2001)和Monico等人,Kidney International62:392400(2002)。增加的草酸盐水平的影响可以出现在多种组织中。例如，在小血管中的沉积会造成难以痊愈的疼痛的皮肤溃疡，在骨髓中的沉积会造成贫血，在骨组织中的沉积会造成骨折或影响儿童的生长，在心脏中的草酸钙沉积会造成心率异常或心脏功能较差。

现有的治疗升高的草酸盐水平的方法不总是有效，且许多原发性高草酸尿患者可能需要密集的透析和器官移植。不同高草酸尿的现有疗法包括高剂量维生素B6,正磷酸盐,镁,铁,铝,柠檬酸钾,考来烯胺,和糖胺聚糖治疗，以及调节饮食和流体摄入、透析和外科手术（例如肾和肝移植）的方案。这些疗法(例如，低草酸盐或低脂肪饮食，维生素B6,足够的钙和增加的流体)仅仅是部分有效的，它们可能具有不希望的不利副作用，例如正磷酸盐、镁或考来烯胺补充的胃肠效应，和透析和手术的风险。因此，需要安全地从身体去除草酸盐的方法。此外，降解草酸盐来降低生物样品中的草酸盐水平的方法，胜过诸如单独阻断草酸盐的吸收或加速草酸盐清除的疗法。

发明内容