[发明专利]一种特异性克伦特罗人工抗原的合成方法

权利要求书

1.一种特异性克伦特罗人工抗原的合成方法，其特征在于以4-氨基-3,5-二氯苯甲酸为半抗原，将4-氨基-3,5-二氯苯甲酸上的羧基通过1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC与N-羟基琥珀酰亚胺NHS活化、或者通过三正丁胺与氯甲酸异丁酯活化，再与载体蛋白进行偶联得到克伦特罗人工抗原，将人工抗原透析，工艺为：

（A）将4-氨基-3,5-二氯苯甲酸用N,N-二甲基甲酰胺DMF溶解，4-氨基-3,5-二氯苯甲酸与N-羟基琥珀酰亚胺NHS，1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC的摩尔比为1:1.5:2，在4℃避光搅拌反应1h，再在室温反应12h，得活化的半抗原溶液；

取牛血清白蛋白，半抗原与牛血清白蛋白的摩尔比为80:1，牛血清白蛋白用0.1M pH9.6碳酸盐缓冲液溶解，其中溶解后的牛血清白蛋白浓度大于3mg/mL，且碳酸盐缓冲液与N,N-二甲基甲酰胺DMF的体积比例为5:1；将活化的半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中，室温反应24h，用PBS缓冲液透析2天，期间更换PBS缓冲液4次，得到克伦特罗人工抗原；

或（B）将4-氨基-3,5-二氯苯甲酸用N,N-二甲基甲酰胺DMF溶解，4-氨基-3,5-二氯苯甲酸与三正丁胺，氯甲酸异丁酯的摩尔比为1:1.2:1.2，0℃反应1h，得活化的半抗原溶液；

取牛血清白蛋白，半抗原与牛血清白蛋白的摩尔比为80:1，牛血清白蛋白用0.1M pH9.6碳酸盐缓冲液溶解，0℃预冷30min，其中溶解后的牛血清白蛋白浓度大于3mg/mL，且碳酸盐缓冲液与N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的体积比例为5:1；在0℃条件下，将活化的半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中，0℃条件下反应1h，然后室温反应24h；用PBS缓冲液透析2天，期间更换PBS缓冲液4次，得到克伦特罗人工抗原。

2.根据权利要求1所述的特异性克伦特罗人工抗原的合成方法，其特征在于，所述载体蛋白为：牛血清白蛋白BSA、阳离子化的牛血清白蛋白cBSA、匙孔血蓝蛋白KLH、血蓝蛋白LPH、鸡卵清白蛋白OVA、人血清白蛋白HSA之一种。

3.根据权利要求1所述的特异性克伦特罗人工抗原的合成方法，其特征在于克伦特罗人工抗原的分子结构式如式I所示：

式I。

4.用权利要求1所述方法合成的特异性克伦特罗人工抗原的应用，其特征在于制备克伦特罗抗体，所述抗体为多克隆抗体和/或单克隆抗体。

5.用权利要求1所述方法合成的特异性克伦特罗人工抗原的应用，其特征在于在检测克伦特罗中的应用，检测食品中的克伦特罗残留。