[发明专利]用于微生物发酵的启动子及其应用

权利要求书

1.一种用于微生物发酵的启动子，其特征在于，包括选自下列核苷酸序列中的一种：

1）如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或其互补的核苷酸序列；

2）如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或其互补的核苷酸序列；

3）如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列或其互补的核苷酸序列；

4）如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列或其互补的核苷酸序列；

5）在严格条件下与SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列杂交且具有相同启动子功能的核苷酸序列；

6）对SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失或添加修饰且具有相同启动子功能的核苷酸序列；

7）与SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列具有90%以上同源性且具有相同启动子功能的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的启动子，其特征在于：所述启动子为如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的启动子，其特征在于：所述如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，其制备方法如下：

提取大肠杆菌BW25113细胞的基因组DNA作为模板，利用该模板进行PCR扩增得到，其中，PCR扩增中的上游引物序列如SEQ ID NO.7所示、下游引物序列如SEQ ID NO.8所示。

4.一种引物对，其特征在于：所述引物对是扩增如权利要求1-3任一项所述的启动子全长或其任意片段的引物对。

5.一种表达载体，其特征在于：所述表达载体含有如权利要求1-3任一项所述的启动子。

6.如权利要求5所述的表达载体，其特征在于：所述表达载体为含有如权利要求1-3任一项所述的启动子的质粒pENA-TA、pCNA-PHC或pENX-TA。

7.一种重组细胞，其特征在于：所述重组细胞含有如权利要求5或6所述的表达载体。

8.一种调控用于发酵的微生物中基因表达的方法，其特征在于：所述方法包括：将如权利要求5或6所述的表达载体转入用于发酵的微生物中；

其中，用于发酵的微生物，包括：产丁醇的大肠杆菌。

9.一种如权利要求1-3任一项所述的启动子的应用，其特征在于：所述启动子在调控用于发酵的微生物中目的基因表达的用途；

其中，目的基因包括：用于合成丁醇的酶基因。

10.一种如权利要求1-3任一项所述的启动子的应用，其特征在于：所述启动子在制备用于厌氧或兼性厌氧发酵生产化学中间体的微生物中的应用。

11.如权利要求10所述的应用，其特征在于：所述启动子在制备用于厌氧发酵生产化学中间体的微生物中的应用；

其中，所述微生物包括：大肠杆菌；化学中间体包括：丁醇。