[发明专利]水稻的白叶枯病抗性的鉴定方法及miRNA1425基因位点的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种水稻的白叶枯病抗性的鉴定方法及miRNA1425基因位点的应用。

背景技术

水稻是我国最主要的粮食作物，白叶枯病是水稻两大主要病害之一，属世界性病害，以亚洲稻区发生为重。白叶枯病发病率高、传染快，发病稻田减产20-30%，甚至能够达到50%。

培育并利用抗病品种是解决白叶枯病造成的粮食减产最经济、最有效的手段，因此，需要对所栽培的水稻白叶枯病抗性进行鉴定。目前，鉴定水稻白叶枯病的方法通常采用DNA(Deoxyribonucleic acid，脱氧核糖核酸)分子标记，利用DNA连锁标记的原理，鉴定水稻是否带有白叶枯病抗性基因，与传统应用的常规遗传标记相比，分子标记具有不受季节、环境限制、不存在表达与否及基因组DNA变异及其丰富等优点。

在实现本发明的过程中，发明人发现现有技术至少存在以下问题：

即便患病的植株中存在抗性基因也不代表该抗性基因具有活性，如果该抗性基因沉默了，那么在生产时依旧会表现为感病，干扰实验人员的判断，若直接投入到生产中，会给粮食生产带来损失。

发明内容

为了解决利用DNA分子标记鉴定水稻是否抗白叶枯病不够准确的缺点，本发明实施例提供了一种水稻的白叶枯病抗性的鉴定方法及miRNA1425基因位点的应用。所述技术方案如下：

一方面，本发明提供了一种水稻的白叶枯病抗性的鉴定方法，包括以下步骤：

接种待测水稻和感病水稻；

分离所述待测水稻和所述感病水稻中的miRNA基因；

检测所述miRNA基因中的miRNA1425基因位点的表达；

根据所述miRNA1425基因位点的表达检测结果，判定所述待测植株是否抗白叶枯病。

具体地，所述miRNA1425基因位点的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。

具体地，将白叶枯菌系P6接种于所述待测水稻和所述感病水稻上。

进一步地，所述接种的部位为所述待测水稻和所述感病水稻的叶片。

具体地，接种后5-10分钟，分离所述miRNA基因。

进一步地，采用miRNA基因分离试剂盒分离所述miRNA基因。

具体地，采用液相Northern杂交法检测所述miRNA1425基因位点的表达。

进一步地，所述液相Northern杂交法所用的探针的序列如序列表中SEQ ID NO:2所示，所述探针的5’端标记有荧光素FITC。

具体地，判定所述待测植株是否抗白叶枯病的方法为：若所述感病水稻的miRNA1425基因位点的表达和所述待测水稻的miRNA1425基因位点的表达相等，则所述待测水稻感病；若所述感病水稻的miRNA1425基因位点的表达明显大于所述待测水稻的miRNA1425基因位点的表达，则所述待测水稻抗病。

另一方面，本发明提供了一种miRNA1425基因位点在鉴定水稻的白叶枯病抗性中的应用。

本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：miRNA基因与普通RNA基因不一样，其序列较短，不容易降解，因此，已经在人类疾病如癌症检测中得到了应用，但利用miRNA基因检测与诊断植物疾病例子很少，主要是因为植物miRNA基因的研究相对落后于人类miRNA基因的研究，通过大量样本的水稻miRNA基因与白叶枯抗性关系的研究，发明人发现miRNA1425基因的表达与白叶枯抗性密切相关，由此，首次提出miRNA1425基因具有检测水稻白叶枯抗性的能力，本发明检测待测水稻和感病水稻中miRNA1425基因位点的表达，通过结果的比对，鉴定待测水稻是否抗白叶枯病，本发明利用miRNA1425基因位点鉴定水稻是否具有白叶枯病抗性，并获得了成功，本发明提供的miRNA1425基因位点的转录是建立在表达水平上的检测，避免了由白叶枯病的抗性基因沉默而造成的误判，本发明未利用常规的DNA连锁标记法，避免了由于DNA连锁不紧密造成的误判，提高了检测的准确性，避免了不必要的生产损失。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例提供的电泳图谱。

具体实施方式