[发明专利]大肠杆菌来源的PCV2 ORF2衣壳蛋白病毒样颗粒的制备在审
申请号: | 201310076992.1 | 申请日: | 2013-03-11 |
公开(公告)号: | CN103173470A | 公开(公告)日: | 2013-06-26 |
发明(设计)人: | 袁于人;莫小兵 | 申请(专利权)人: | 斯澳生物科技(苏州)有限公司 |
主分类号: | C12N15/34 | 分类号: | C12N15/34;C07K14/01;C12N15/63;C12N15/70;C12N1/21;C12N7/04;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93 |
代理公司: | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人: | 范晴 |
地址: | 215000 江苏省苏州市工业*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 大肠杆菌 来源 pcv2 orf2 蛋白 病毒 颗粒 制备 | ||
1.一种全长的PCV2 ORF2基因,其核苷酸序列如Seq ID No.1所示。
2.根据权利要求1所述的PCV2 ORF2基因,其中该基因表达的蛋白能够在大肠杆菌内自组装成病毒样颗粒。
3.一种全长的PCV2 ORF2衣壳蛋白,具有如Seq ID No.2所示的序列。
4.一种含有权利要求1所述基因的表达载体。
5.根据权利要求4所述的表达载体,所述表达载体为适于在大肠杆菌中表达的载体。
6.一种含有权利要求4表达载体的细胞。
7.一种制备纯化PCV2 ORF2基因表达的衣壳蛋白的方法,包括如下步骤:
(1)在大肠杆菌表达系统中表达PCV2 ORF2基因,
(2)将表达了PCV2 衣壳蛋白的大肠杆菌破碎,分离得到上清液,
(3)用硫酸铵分级分离:先用30%硫酸铵沉淀除去部分杂蛋白,然后用50%硫酸铵沉淀目的蛋白,
(4)将上述目的蛋白在150mM-2500mM盐溶液中重新溶解,离心沉淀得到目的蛋白。
8.根据权利要求7所述的制备纯化方法,其中,将所述步骤(4)的重悬上清液通过滤膜过滤,进一步通过色谱层析纯化目的蛋白。
9.一种PCV2类病毒颗粒,其中该类病毒颗粒含有权利要求1或2基因表达的蛋白或者包含由权利要求3的蛋白。
10.一种用于预防PCV2感染的疫苗,其包括:(1)权利要求9的PCV2类病毒颗粒,及疫苗用赋形剂或载体。
11.一种预防PCV2感染的方法,其包括将含预防有效量的权利要求1-2任一项的PCV2 cap蛋白或权利要求7的类病毒颗粒的疫苗或预防有效量的权利要求9的疫苗给予需要预防PCV2感染的猪。
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