[发明专利]龟裂链霉菌发酵生产土霉素的培养基及发酵方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种龟裂链霉菌发酵生产土霉素的培养基及发酵方法。 

背景技术

土霉素为广谱抗生素，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌都有抑制作用，对衣原体、立克次氏体、霉形体、螺旋体等也有一定的抑制作用。土霉素主要用于防治畜禽大肠杆菌、沙门氏菌感染、巴氏杆菌、布氏杆菌感染及猪喘气病、鸡慢性呼吸道病；也常用于治疗狗的立克次氏体病、猫的传染性贫血，预防狗的衣原体病和钧端螺旋体病；局部用于坏死杆菌所引起的子宫内膜炎及组织坏死等；作为饲料舔加剂使用，具有促进生长和提高饲料转化率的作用。 

据报道，国内生产土霉素采用发酵模式，存在的主要问题有以下几点： 

1 种子、发酵培养基成分复杂。国内采用发酵模式生产土霉素，其发酵培养基中氮源分别由动物性蛋白和植物性蛋白混合组成，其成分比例对发酵结果影响较大。使用花生饼粉和棉籽饼粉作为发酵培养基的氮源，由于其质量差，杂质含量高，影响菌种代谢产物，导致发酵液颜色加深，发酵单位较低，发酵单位一般为20000～23000，最终影响产品质量；如果动物性蛋白配伍比例高，则发酵过程中会产生大量泡沫，如不严加控制，就会产生发酵液逃液，导致染菌。同时由于发酵液粘度较高，对后提炼的收率影响较大。

2 土霉素发酵培养添加的有机氮源动物性蛋白质，如鱼粉、脂肪类提取物，由于受到市场行情和季节的影响，采购的成本和压力大。 

3 土霉素发酵模式采用三级发酵。发酵周期长，能耗高；工艺控制较为复杂，特别是温度、搅拌速度、补料和pH控制参数对发酵单位、发酵液体积影响较大。 

4 由于受到培养基配方、生产工艺和发酵环境的影响，国内土霉素生产厂家的发酵技术水平差异大，其发酵水平控制在20000～30000u/ml。 

发明内容

本发明目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种有效提高发酵单位，同时最大限度的降低原辅料对发酵单位的影响，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现土霉素稳定、高效生产的龟裂链霉菌发酵生产土霉素的培养基。 

本发明的另一目的是提供利用上述培养基生产土霉素的发酵方法。 

为实现上述目的所采取的技术方案为： 

一种龟裂链霉菌发酵生产土霉素的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于上述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基中包含有低温黄豆饼粉。

上述一级种子培养基的组成为：玉米浆3～4ml/L、低温黄豆饼粉5～10g/L、硫酸铵6～8g/L、玉米淀粉15～20g/L、碳酸钙2～3g/L、氯化钠0.9～1g/L、磷酸二氢钾0.3～0.4g/L、氯化钴0.004～0.007g/L、酵母粉5～10g/L、麦芽糊精15～20g/L、玉米油15～20g/L。 

上述二级种子培养基的组成为：玉米浆15～20ml/L、低温黄豆饼粉22～25g/L、硫酸铵50～80g/L、玉米淀粉80～90g/L、碳酸钙14～16g/L、氯化钠0.9～1.1g/L、磷酸二氢钾3.0～4.0g/L、氯化钴0.006～0.008g/L、酵母粉60～70g/L、麦芽糊精50～60g/L、玉米油20～25g/L。 

上述发酵培养基的组成为：玉米浆80～100ml/L、低温黄豆饼粉100～120g/L、硫酸铵300～320g/L、玉米淀粉580～600g/L、碳酸钙45～50g/L、氯化钠0.9～1.1g/L、磷酸二氢钾10.0～12.0g/L、氯化钴0.006～0.008g/L、酵母粉230～250g/L、麦芽糊精50～60g/L、固体消泡剂（聚硅氧烷）2～3g/L、淀粉酶1～3g/L、硫酸锌10～12g/L。 

利用上述培养基的发酵方法，其特征在于采用双种方式进行发酵，具体工艺步骤为： 

1）    一级种子培养：

首先将一级种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，分别将已经培养好的龟裂链霉菌母瓶发酵液接入两个一级种子罐进行培养，接种量控制在一级种子培养基体积的6～10％。其中一个种子罐的培养基体积是另一个一级种子培养基体积的一半。

培养条件为：罐压0.05～0.06MPa；罐温29～31℃；空气流量：0～8h，20～30m³/h；8h～移种：50～60m³/h；搅拌转速100～120r/min；pH6～8；培养时间25～35h。 

移种标准：一级种子培养结束，其菌体浓度20～25%；pH值6～8；无其它杂菌污染。