[发明专利]一种固相制备促胰液素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种固相制备多肽药物的方法，特别涉及一种固相制备促胰液素的方法，属于药物化学领域。

背景技术

促胰液素(英文名Secretin)是由位于十二指肠和空肠上段粘膜中的S细胞分泌，由27个氨基酸组成的具有螺旋结构的碱性多肽，具有调节胰腺外分泌、抑制胃酸分泌和胃运动等多种生理功能，其肽序为H-His-Ser-

                                                    1Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Gl                    8                                16n-Arg-Leu-Leu-Gln-Gly-Leu-Val-NH₂，也简写为HSDGTFTSELSRLRDSA

          24RLQRLLQGLV-NH₂，其结构式如下：

现有技术secretin的逐步偶联的合成，采用全液相合成(JACS，1967,6753，采用全液相合成的缺点在于合成范围小，一般都集中在10个氨基酸以内的多肽合成，还有合成中需要对中间体进行提纯，时间长，工作量大。采用该方法，secretin的逐步偶联的合成总收率小于10%。

Helv.Chim.Acta1976,1112,Int.J.Peptide Protein Res,1977,63)，固相采用Boc-策略(Int.J.Peptide Protein Res,1977,63)合成secretin，固相Boc-策略中，反复地用酸来脱保护，这种处理带来了以下问题：如在肽与树脂的接头处，当每次用50%TFA脱Boc基时，有约1.4%的肽从树脂上脱落，合成的肽越大，这样的丢失越严重;此外，酸催化会引起侧链的一些副反应，Boc合成法尤其不适于合成含有色氨酸等对酸不稳定的肽类。

现有技术(JACS,1968,4711;Chem.Ber.1972,2508;Chem.Ber.1974,215)公开了一种片段偶联法制备secretin，由于secretin结构中既有多个疏水性的Leu、Val，又有亲水性的Lys、His和Arg等，使片断的溶解性很差，进而在片断合成以及各片断偶联的过程中需要大量溶剂，且由于反应液浓度较稀，使反应不够完全。

另外，还有一种合成方法(US4755591)采用高氯酸保护的Arg，能改善片断的溶解性，其先采用Z策略合成片断，然后再脱除Z保护基后用高氯酸处理得到高氯酸保护Arg的片断。由于上高氯酸前和上高氯酸后的片断均需纯化，故增加了合成和纯化的工作量。

上述现有技术虽能用于secretin的合成，但是收率较低，其中，secretin的液相逐步偶联的合成总收率小于10%；固相Boc-策略合成总收率小于20%；采用高氯酸保护Arg的合成策略其合成总收率小于30%。因此，为提高secretin的合成收率，降低生产成本，提高该品的产业化生产和广泛应用，需进一步研究新的高收率合成方法。

发明内容

本发明采用固相Fmoc策略进行合成，为了解决合成中的溶解性问题和肽链在合成中的折叠问题，使用假脯氨酸代替肽链中的部分丝氨酸进行合成，有效地提高了促胰液素的收率和纯度，更易于产业化。

本发明所述一种固相制备促胰液素的方法，包括以下步骤：

1)选择合适的固相载体；

2)按照固相合成方法，逐个偶联氨基酸；

3)裂解，得到粗肽；

4)粗肽经纯化得到Secretin。

步骤1)中所述的固相载体为Rink Amide树脂、Rink Amide-AM树脂或Rink Amide-MBHA树脂等氨基树脂，树脂替代度为0.1-0.6mmol/g，优选0.1-0.4，更优选0.15-0.25。

所选择该树脂为氨基树脂，用于C端为酰胺的secretin的合成，易于合成氨基酸及其片段的搭载。

树脂的替代度由发明人通过大量的实验筛选得出，当替代度高于0.6mmol/g，偶联肽链较长后会降低偶联效果；而替代度低于0.6mmol/g，消耗树脂增多进而使成本上升。