[发明专利]一种固相制备促胰液素的方法

权利要求书

1.一种固相制备促胰液素的方法，包括以下步骤：

1)选择合适的固相载体，所述的固相载体为Rink Amide树脂、RinkAmide-AM树脂或Rink Amide-MBHA树脂，树脂替代度为0.1-0.6mmol/g；

2)按照Fmoc固相多肽合成方法，依促胰液素肽序从Val端逐个偶联氨基酸，其中，选择假脯氨酸代替16位和8位Ser，或者假脯氨酸仅代替16位的Ser；

3)裂解，得到粗肽；

4)粗肽经纯化得到Secretin。

2.根据权利要求1所述的一种固相制备促胰液素的方法，其特征在于：所述的步骤1)中树脂替代度为0.1-0.4mmol/g。

3.根据权利要求1所述的一种固相制备促胰液素的方法，其特征在于：所述的步骤1)中树脂替代度为0.15-0.25mmol/g。

4.根据权利要求1至3任一权利要求所述的一种固相制备促胰液素的方法，其特征在于：所述的步骤2)中偶联剂为DIPCDI+A或者DIPEA+A+B，其中A为HOBt或HOAt，B为PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU、TBTU中的一种，DIPCDI:A摩尔比为1.3:1.2，DIPEA:A:B摩尔比为2.0:1.2:1.0。

5.根据权利要求1至3任一权利要求所述的一种固相制备促胰液素的方法，其特征在于：步骤3)中裂解试剂为TFA+TA+TIS+EDT+H₂O，TFA：TA：TIS：EDT：H₂O体积比为80～90:0～2:0～3:0～5:0～5。

6.根据权利要求4所述的一种固相制备促胰液素的方法，其特征在于：步骤3)中裂解试剂为TFA+TA+TIS+EDT+H₂O，TFA：TA：TIS：EDT：H₂O体积比为80～90:0～2:0～3:0～5:0～5。

7.根据权利要求1至3任一权利要求所述的一种固相制备促胰液素的方法，其特征在于：依促胰液素肽序从Val端逐个偶联氨基酸是指，首先，Fmoc-Val-OH与树脂在偶联剂下偶联得到Fmoc-Val-树脂，在脱保护溶剂下脱除Fmoc；与Fmoc-Leu-OH在偶联剂作用下偶联得到Fmoc-Leu-Val-树脂，在脱保护溶剂下脱除Fmoc；与Fmoc-Gly-OH在偶联剂作用下偶联得到Fmoc-Gly-Leu-Val-树脂，在脱保护溶剂下脱除Fmoc；与Fmoc-Gln-OH在偶联剂作用下偶联得到Fmoc-Gln-Gly-Leu-Val-树脂；然后，按照上述方法及下列氨基酸顺序依次偶联:

(1)Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Gln-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Ser[psi(Me,Me)Pro]-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH；

或者(2)Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Gln-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Ala-Ser[psi(Me,Me)Pro]-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Ser[psi(Me,Me)Pro]-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH。