[发明专利]一种链霉亲和素突变体及其制备方法

权利要求书

1.一种链霉亲和素突变体，其特征在于：所述链霉亲和素突变体的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:7所示。

2.根据权利要求1所述的一种链霉亲和素突变体，其特征在于：所述链霉亲和素突变体包含5个氨基酸的突变，分别为E14D、T42Y、Y43T、S52G、R53D。

3.一种基于权利要求1所述的链霉亲和素突变体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）已知的具有159个氨基酸的链霉亲和素成熟氨基酸，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:8所示，取其中的121个氨基酸 (13～133) 作为合成对象，并且引入两个氨基酸的突变：S52G、R53D ，得到的121个氨基酸的突变序列如序列表中的SEQ ID NO:9所示；

2）将所述121个氨基酸的突变序列经DNAWorks逆翻译成核苷酸序列，所述核苷酸序列的密码子经DNAWorks优化，并且添加了起始密码ATG和终止密码TAA；

3）添加了起始密码ATG和终止密码TAA的所述核苷酸序列通过PCR合成人工DNA序列，所述人工DNA序列命名为SA122m2，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:10所示；

4）通过随机突变PCR改造SA122m2，获取其它氨基酸改变对其结合生物素功能的影响，从随机突变产生的DNA文库，选取了1株突变体，命名为SA122m5，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:7所示，包含了5个密码子突变，产生了5个天然氨基酸的改变，分别为E14D、T42Y、Y43T、S52G、R53D；

5）构建原核表达工程载体pET28a-SA122m5；

6）构建原核表达工程菌株BL21(DE3)-pET28a-SA122m5；

7）原核表达工程菌株BL21(DE3)-pET28a-SA122m5的扩增、诱导表达；

8）SA122m5的提取与纯化；

9）SA122m5的生物活性测定。