[发明专利]一种利用一步法酶联免疫技术快速检测呋喃西林的试剂盒

权利要求书

1.一种利用一步法酶联免疫技术快速检测呋喃西林的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：呋喃西林代谢物特异性抗体、酶标板、呋喃西林代谢物辣根过氧化物酶标记物、呋喃西林代谢物标准品、酶标物稀释液、显色剂、清洗液、终止液和样品稀释液。

2.根据权利要求1所述一种利用一步法酶联免疫技术快速检测呋喃西林的试剂盒，其特征在于，所述呋喃西林代谢物特异性抗体包被在酶标板上。

3.根据权利要求1所述一种利用一步法酶联免疫技术快速检测呋喃西林的试剂盒，其特征在于，所述呋喃西林代谢物特异性抗体为动物抗呋喃西林代谢物的多克隆抗体，用呋喃西林代谢物与载体蛋白偶联物作为免疫原通过免疫动物制得。

4.根据权利要求3所述一种利用一步法酶联免疫技术快速检测呋喃西林的试剂盒，其特征在于，所述动物为兔、鼠或羊。

5.一种利用一步法酶联免疫技术快速检测呋喃西林的方法，其特征在于，按照如下步骤进行：

(1)样品前处理：对于肌肉、肝脏、鱼、虾的组织，供试样用均质器均质样本，取1.0±0.05g的均质物进行以下操作；对于蜂蜜样品直接称取1.0±0.05g的供试样进行以下操作；

(2)加入4mL蒸馏水，0.5mL1M盐酸和150μL50mM的4-硝基苯甲醛溶液，涡旋混匀30s，60℃水浴3h，每隔1h涡旋振荡一次；

(3)加入5mL0.1M磷酸氢二钾和0.4mL1M氢氧化钠溶液，混匀加入6mL乙酸乙酯，振荡1-40min，室温条件下，4000g离心10min，收集3mL上层液体至10mL玻璃试管，50～60℃水浴氮气吹干；

(4)加入1mL正己烷，涡旋混匀30s，然后加入1mL样品稀释液复溶，振荡混匀30s，室温条件下3000g离心5min弃去上层有机相，取下层水相50μL用于分析；对于饲料样品，称取1.0±0.05g粉碎的样本加入10mL乙腈，65℃超声波提取15min，室温下4000rpm离心10min，取上清液2mL，于50～60℃水浴环境中氮气吹干，加入1mL样品稀释工作液溶解干燥物，充分混匀后用样品稀释液再做10倍稀释，取50μL用于分析；

(5)预先进行编号，标记B₀、呋喃西林代谢物标准品和样品的位置，进行双孔检测；从包被有呋喃西林代谢物特异性抗体的酶标板上取下所需数量的微孔，将多余的重新密封并放回2～8℃保存；将酶标物稀释液、样品稀释液、清洗液配制成工作液；在B₀孔中加入50μL0.0ng/mL呋喃西林代谢物标准品溶液；在各标准孔中加入50μL的呋喃西林代谢物标准品溶液，在各样品孔中加入50μL样品溶液；立即在所有孔中加入100μL的呋喃西林代谢物辣根过氧化物酶标记物，晃动反应板1-10s；室温下温浴30min；倒掉微孔中的液体，在所有微孔中加满清洗液；在吸水纸上拍打；用微量移液器在每个微孔中加入100μL显色剂，晃动酶标板使之彻底混匀，室温下显色10min；每孔中加入100μL终止液，混匀在450nm下检测吸光度，分析检测结果。