[发明专利]细菌生物膜相关性鼻窦炎动物模型的造模方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及一种建立细菌生物膜相关性鼻窦炎动物疾病模型的造模方法。

背景技术

研究报道，细菌生物膜（bacterial biofilm，BBF)是细菌的一种保护性生长模式，由于BBF的特殊结构，抗生素对其内部的细菌不能起到有效的杀灭作用，同时使机体产生的抗体非但不能杀灭细菌，反而在BBF表面形成免疫复合物，导致炎性反应的持续存在。慢性鼻窦炎是耳鼻咽喉科常见疾病，其中约10％的患者始终无法获得理想的临床治疗效果，该部分患者通常被称为难治性鼻窦炎。有研究发现，难治性鼻窦炎患者鼻粘膜上细菌生物膜的阳性率达100％，鼻粘膜细胞和纤毛结构被严重破坏。因此，目前普遍认为BBF是影响难治性鼻窦炎治疗效果最主要的因素之一。如何针对鼻粘膜中的BBF进行有效的治疗是目前鼻科学领域亟待解决的难题。临床实践中，尚不能完全以患者为对象来研究疾病的发生机制及治疗效果，其不仅在时间和空间上存在局限性，而且在伦理学和方法上也受到限制，因此，借助于疾病模型，尤其是动物疾病模型，可以更方便、有效地认识人类疾病的发生发展规律、研究防治措施。通常，本领域认为较好的疾病模型应具有以下特点：与人类疾病具有相似性，重复性好，经济，易行。目前已有的两个BBF相关性鼻窦炎模型，均存在操作复杂，对动物鼻窦损伤较大等问题，故存在较大的改进空间。

2005年，Palmer等以新西兰大白兔为实验动物，通过上颌窦前壁开窗、封闭上颌窦口后植入铜绿假单胞菌的方法造模，用扫描电镜检测后发现在造模520天后的兔上颌窦黏膜中有细菌生物膜的存在。但目前研究发现，金黄色葡萄球菌才是鼻窦炎患者鼻粘膜中BBF的最常见致病菌并与鼻窦炎的难治性密切相关，因此对鼻粘膜中BBF治疗效果的评价应以金黄色葡萄球菌形成的BBF为目标。因此，利用铜绿假单胞菌获得的动物模型与人类BBF相关性鼻窦炎相比，致病菌存在较大差异，因此对于研究疾病的发生、发展及治疗效果均有较大影响。同时，在造模过程中，需要去除上颌窦前壁的大范围骨质以便于暴露和堵塞上颌窦口，对上颌窦正常的结构和功能影响较大，易于发生上颌窦骨壁和黏膜的坏死性炎症以及局部皮肤溃破、溢脓。2007年，Wormald等利用金黄色葡萄球菌建立了细菌生物膜相关的鼻窦炎动物模型，其中，以羊为实验动物，通过额窦内注射金黄色葡萄球菌并堵塞额窦口的方法造模，结果发现所有动物的额窦内均形成了BBF。虽然这一模型的致病菌与人类BBF相关性鼻窦炎最常见的致病菌相同，结果较可靠，但仍存在以下缺陷：1，过程复杂，需要对动物进行全身麻醉和气管插管呼吸机辅助呼吸；2，操作难度大，需要在鼻内镜下切除羊的中鼻甲和前组筛窦；然后，通过额窦前壁钻孔注射荧光素，在鼻内镜下确认额窦口的位置并予以完全堵塞；3，以羊为模型动物价格昂贵且操作不便，不适于需要大样本量的科学研究。

鉴于现有动物模型存在以上各种问题，本发明拟提供一种与人类BBF相关性鼻窦炎更为相似且经济易行，结果稳定可靠的疾病模型的造模方法。

与本发明相关的现有技术有：

[1]Perloff J R,Palmer J N.Evidence of bacterial biofilms in a rabbit model of sinusitis[J].Am J Rhinol,2005,19(1):1-6.

[2]Jervis-Bardy J,Foreman A,Field J,et al.Impaired mucosal healing and infection associated with Staphylococcus aureus after endoscopic sinus surgery[J].Am J Rhinol Allergy，2009,23(5):549-552.

[3]Singhal D,Foreman A,Jervis-Bardy J,et al.Staphylococcus aureus biofilms:Nemesis of endoscopic sinus surgery[J].Laryngoscope,2011,121(7):1578-1583.

[4]Ha K R,Psaltis A J,Tan L,et al.A sheep model for the study of biofilms in rhinosinusitis[J].Am J Rhinol,2007,21(3):339-345.