[发明专利]无抗多效价迟钝爱德华氏菌载体活疫苗、其制备及其应用

权利要求书

1.一种迟钝爱德华氏菌多效价载体活疫苗株，其特征在于，所述迟钝爱德华氏菌基因组缺失天冬氨酸半缩醛合成酶基因asdB，并含有回补质粒，所述回补质粒含有SD-asdB片段和异源免疫原编码序列，所述SD-asdB片段由操作性相连的SD序列和迟钝爱德华氏菌天冬氨酸半缩醛合成酶编码序列构成，所述回补质粒不含抗生素标记，所述异源免疫原编码序列与调控序列操作性相连从而能够在迟钝爱德华氏菌中表达。

2.如权利要求1所述的活疫苗株，所述回补质粒中天冬氨酸半缩醛合成酶编码序列编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列，较好的是，所述编码序列的起始密码子为GTG。

3.如权利要求1所述的活疫苗株，所述SD-asdB片段中的SD序列是AAGA。

4.如权利要求1所述的活疫苗株，所述SD-asdB片段的序列选自SEQ ID NO:2所示和SEQ ID NO:3所示。

5.如权利要求1所述的活疫苗株，所述异源免疫原是嗜水气单胞菌的甘油醛三磷酸脱氢酶即GAPDH，例如氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的GAPDH，较好的是，所述GAPDH的编码序列如SEQ ID NO:5中所示。

6.如权利要求1所述的活疫苗株，所述回补质粒含有与所述异源免疫原操作性相连的迟钝爱德华氏菌铁诱导性启动子P_dps。

7.如权利要求6所述的活疫苗株，所述铁诱导性启动子P_dps序列如SEQ ID NO:6所示。

8.如权利要求1所述的活疫苗株，其中，以保藏号为CCTCC NO:M2010278的迟钝爱德华氏菌WED为出发菌株构建而得。

9.如权利要求1所述的活疫苗株，所述回补质粒以pUTt质粒为出发质粒构建而成。

10.如权利要求1所述的活疫苗株，是保藏号为CCTCC NO:M2012341的迟钝爱德华氏菌EIB AVM1。

11.制造权利要求1所述迟钝爱德华氏菌多效价载体活疫苗株方法，包括：

敲除迟钝爱德华氏菌出发菌株的基因组天冬氨酸半缩醛合成酶基因asdB，制得asdB缺失菌株，

获取回补质粒，所述回补质粒含有SD-asdB片段和异源免疫原编码序列，所述SD-asdB片段由操作性相连的SD序列和迟钝爱德华氏菌天冬氨酸半缩醛合成酶编码序列构成，所述回补质粒不含抗生素标记，所述异源免疫原编码序列与调控序列操作性相连从而能够在迟钝爱德华氏菌中表达，

用所述回补质粒转化所述asdB缺失菌株，得到所述迟钝爱德华氏菌多效价载体活疫苗株。

12.如权利要求11所述的方法，所述迟钝爱德华氏菌出发菌株是保藏号为CCTCC NO:M2010278的迟钝爱德华氏菌WED。

13.如权利要求11所述的方法，所述回补质粒以pUTt质粒为出发质粒构建而成。

14.如权利要求11所述的方法，所述回补质粒中天冬氨酸半缩醛合成酶编码序列编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列，较好的是，所述编码序列的起始密码子是GTG。

15.如权利要求11所述的方法，所述SD-asdB片段中的SD序列是AAGA。

16.如权利要求11所述的方法，所述SD-asdB片段的序列选自SEQ ID NO:2所示和SEQ ID NO:3所示。

17.如权利要求11所述的方法，所述异源免疫原是嗜水气单胞菌的GAPDH，例如氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的GAPDH，较好的是，所述GAPDH的编码序列如SEQ ID NO:5中所示。

18.如权利要求11所述的方法，所述回补质粒含有与所述异源免疫原操作性相连的迟钝爱德华氏菌铁诱导性启动子P_dps。

19.如权利要求18所述的方法，所述铁诱导性启动子P_dps序列如SEQ ID NO:6所示。

20.权利要求1所述迟钝爱德华氏菌多效价载体活疫苗株用于制造鱼用药物的用途，所述药物用于防治迟钝爱德华氏菌和/或嗜水气单胞菌感染。