[发明专利]一个长链非编码RNA基因在制备干扰和抑制剂上的应用方法

权利要求书

1.一个长链非编码RNA基因在制备干扰和抑制剂上的应用方法，其特征在于，根据该长链非编码RNA基因制备了用于干扰其表达，并导致抑制肝癌细胞生长的制剂；该基因转录本序列为序列表中SEQ ID NO：1-12所示的核苷酸序列中的任一条；或者是与序列表中SEQ ID NO：1-12任一条所示的序列具有90%以上同源性的核苷酸序列；或者是与序列表中SEQ ID NO：1-12任一条所示的序列经硫代修饰或/和甲氧基修饰得到的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的应用方法，其特征在于，所述的制剂是针对该长链非编码RNA基因设计的用于RNA干扰的短发夹RNA表达载体。

3.根据权利要求1或2所述的应用方法，其特征在于，所述的用于制备用于RNA干扰的短发夹RNA表达载体所需的4条干扰靶点序列如下：

shRNA-1：GGACAAGGTCCAAGCTCTTAC

shRNA-2：GCAGTGCAGCAGTATCATTGC

shRNA-3：GCAGCAGTATCATTGCTTAGC

shRNA-4：GCAGCTCTGTGTGAGATTTGT。

4.根据权利要求3所述的应用方法，其特征在于，

针对4条干扰靶点序列，以及载体，设计可形成发夹结构的寡核苷酸单链及其反向互补序列，它们退火后即可形成两端分别带限制性酶切位点粘性末端的DNA双链；具体序列如下：

shRNA-1：

5’-GATCCCC GGACAAGGTCCAAGCTCTTAC TTCAAGAGA GTAAGAGCTTGGACCTTGTCC TTTTTA-3’

3’-GGG CCTGTTCCAGGTTCGAGAATG AAGTTCTCT CATTCTCGAACCTGGAACAGG AAAAATTCGA-5’shRNA-2：

5’-GATCCCC GCAGTGCAGCAGTATCATTGC TTCAAGAGA GCAATGATACTGCTGCACTGC TTTTTA-3’

3′-GGG CGTCACGTCGTCATAGTAACG AAGTTCTCT CGTTACTATGACGACGTGACG AAAAATTCGA-5’shRNA-3：

5’-GATCCCC GCAGCAGTATCATTGCTTAGC TTCAAGAGA GCTAAGCAATGATACTGCTGC TTTTTA-3’

3’-GGG CGTCGTCATAGTAACGAATCG AAGTTCTCT CGATTCGTTACTATGACGACG AAAAATTCGA-5’shRNA-4：

5’-GATCCCC GCAGCTCTGTGTGAGATTTGT TTCAAGAGA ACAAATCTCACACAGAGCTGC TTTTTA-3’

3’-GGGCGTCGAGACACACTCTAAACA AAGTTCTCTT GTTTAGAGT GT GTCTCGACG AAAAATTCGA-5’。