[发明专利]一种用于CYP3A5SNP rs776746分型快速检测的试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种用于CYP3A5SNP(rs776746)分型快速检测的试剂盒，其特征在于，包括：盒盖、盒体、能够嵌入所述盒体的装有酶反应混合物的容器、能够嵌入所述盒体的装有引物混合物的容器、能够嵌入所述盒体的装有阳性对照的容器、和能够嵌入所述盒体的装有水的容器。

2.根据权利要求1所述的用于CYP3A5SNP(rs776746)分型快速检测的试剂盒，其特征在于，所述装有引物混合物的容器中装有外围引物1、外围引物2、内引物1和内引物2，所述外围引物1的核苷酸序列如SEQ IDNO:l所示，所述外围引物2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述内引物1的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述内引物2的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

3.根据权利要求2所述的用于CYP3A5SNP(rs776746)分型快速检测的试剂盒，其特征在于，所述外围引物和所述内引物的浓度比为1:5~1:7。

4.根据权利要求3所述的用于CYP3A5SNP(rs776746)分型快速检测的试剂盒，其特征在于，所述外围引物1和所述外围引物2的浓度均为0.714μM，并且所述内引物1和所述内引物2的浓度均为4.286μM。

5.根据权利要求1所述的用于CYP3A5SNP(rs776746)分型快速检测的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为GG型(*3/*3)、AA型(*1/*1)、AG型（*1/*3）的模版DNA。

6.根据权利要求1所述的用于CYP3A5SNP(rs776746)分型快速检测的试剂盒，其特征在于，所述酶反应混合物包括DNA聚合酶、dNTP和MgCl₂。

7.一种用于CYP3A5SNP(rs776746)分型快速检测的检测方法，该方法包括下列步骤：

1）使用权利要求1至6中任一项所述试剂盒来制备PCR反应体系；

2）按照下列条件进行PCR反应，以得到扩增产物：

94℃-98℃预变性10-20min；

94℃-98℃变性20-40sec，54℃-56℃复性20-40sec，68℃-72℃延伸20-40sec，25-45个循环；

68℃-72℃延伸5-10min；

3）将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测；

4）电泳检测后，出现389bp及237bp条带为AA型(*1/*1)，出现389bp及201bp条带为GG型(*3/*3)，出现389bp、237bp及201bp条带为AG型（*1/*3）。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，在所述步骤2）中按照下列条件进行PCR反应：

95℃预变性15min；

95℃变性30sec，55℃复性30sec，72℃延伸30sec，42个循环；

72℃延伸7min。