[发明专利]一种利用HPLC-ELSD检测剑麻皂苷元含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测剑麻皂苷元含量的方法，特别涉及一种利用HPLC-ELSD（高效液相色谱-蒸发光散射检测器）检测剑麻皂苷元含量的方法。

背景技术

剑麻皂苷元的主要成分是替可吉宁（Tigogenin），化学名称是5α,25D-螺甾烷-3b羟基，结构式如下：

。

剑麻皂苷元是从生产剑麻纤维传统产品之后废弃的麻汁和麻渣中提取的天然植物皂苷元，是合成甾体激素类药物的医药中间体和重要原料，广泛应用于肾上腺皮质激素、性激素及蛋白同化激素三大类200多种药物的制造；药理研究表明，这些皂苷元成分具有较明显的抗炎、抗菌、止血、抗衰老和降血糖的生物活性。剑麻皂苷元来自于剑麻纤维传统产品之后废弃的麻汁和麻渣。

随着人们生活水平的不断提高，天然药物的使用越来越受到人们的青睐，剑麻皂苷元的开发利用愈显重要，为了提高皂苷元品质，对生产的产品皂苷元含量的检测监控是必不可少的；目前，应用高效液相色谱蒸发光散射检测器法测定植物体内的甾体皂苷国内外均有报道，薄层色谱法（TLC）（万建波，李绍平，简家荣等2004）、气相质谱联用法（GC-MS）（J.F.Cui, I.Bjorkhem, P.Eneroth 1997）、高效液相色谱（HPLC-UV）（A.J.Lau, B.H.Seo, S.O.Woo, et al 2004; L.Li, J.L.Zhang, Y.X.Sheng, et al 2005）、分光光度法（J.C.Baccou, F.Lambert, Y.Sauvaire 1977），但这些方法有耗时长、设备昂贵等不足，并且应用HPLC- ELSD（高效液相色谱-蒸发光散射检测器）法检测剑麻皂苷元未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用HPLC-ELSD检测剑麻皂苷元含量的方法，该方法提高了从剑麻废弃物中分离提取剑麻皂苷元的质量标准，以达到合成甾体激素类药物前体物质的质量要求。

具体步骤为：

(1)设置装置：

设置HPLC装置岛津LC-20AB高效液相色谱仪工作站的色谱条件：Shim-pack VP-ODS， C₁₈柱的规格为长度250 毫米×内径4.6毫米×粒度5微米；开启ELSD检测器，设置漂移管温度为40℃，载气压力为350KPa，待所设置参数平稳后将无水甲醇和去离子水作为A泵和B泵的流动相输入岛津LC-20AB高效液相色谱仪工作站，设置A泵和B泵的流动相中无水甲醇和去离子水的体积比为9:1，流速为1.0毫升/分钟，保留时间为35分钟，柱温为40℃，待基线平稳，进入工作状态。

(2)标准曲线绘制：

称量剑麻皂苷元标准品，用无水甲醇定容于容量瓶中，分别制成剑麻皂苷元含量为50、100、200、300、500、1000和2000微克/毫升的溶液，分别注入步骤(1)设置的进入工作状态的HPLC装置的色谱柱10微升，分别计算同一保留时间下的峰面积，以含量x为横坐标，以峰面积y为纵坐标绘制标准曲线，作出标准曲线方程：y = f(x)，含量在50~2000微克/毫升范围。

(3) 检测待测剑麻皂苷元样品中剑麻皂苷元的含量：

将待测剑麻皂苷元样品注入步骤(1)设置的进入工作状态的HPLC装置的色谱柱10微升，计算同一保留时间下的峰面积，代入步骤(2)所得的标准曲线方程，即计算出待测剑麻皂苷元样品中剑麻皂苷元的含量。

所述无水甲醇和去离子水均用0.45纳米微孔滤膜过滤，然后置于超声仪中超声60~120分钟。

所述剑麻皂苷元标准品的纯度为市售色谱纯。

本发明的检测方法中剑麻皂苷元的含量在50~2000微克/毫升的范围内与同一保留时间下的峰面积呈线性关系，可利用这一规律对剑麻皂苷元的含量作检测，且本发明采用HPLC- ELSD，即高效液相色谱和蒸发光散射检测器相结合，灵敏度高，检测快速，且不受流动相组成的干扰，不要求被测主要成分有特定的化学结构，因此，对剑麻皂苷元检测的效果好。

附图说明

图1 为本发明实施例中所使用的剑麻皂苷元标准品的高压液相色谱图。 

图2 为本发明实施例中待测剑麻皂苷元样品的高压液相色谱图。

具体实施方式

实施例:

(1)设置装置：