[发明专利]与肾上腺脑白质营养不良症相关的基因突变及其检测试剂

说明书

技术领域

本发明涉及与肾上腺脑白质营养不良症相关的基因突变、检测该突变所使用的引物、探针、抗体和试剂盒。

背景技术

肾上腺脑白质营养不良（adrenoleukodystrophy，ALD)是一种遗传性疾病，其特点是进行性弥漫性脑白质硬化，伴有肾上腺皮质功能减退。X染色体连锁性的ALD是最常见的一种类型，其临床表现具有高度异质性。ALD儿童患者仅见于男性，进行性神经性失能，10岁前发病，平均发病年龄7.2+/-1.7岁（2.75-10岁），3岁前多数发育正常，无精神运动障碍。86%病例先出现神经系统症状，其中85%对ACTH兴奋显示皮质醇分泌不足，追问病史曾有不能解释的恶心、呕吐、脱水、无力、皮肤色素沉着等肾上腺皮质功能减退的表现，早期的神经精神症状表现为情绪不稳定，学习成绩不良，继而快速发展为顶颞叶功能障碍，语言辨别能力和实体觉丧失，体全觉差；1/3早期病例视觉丧失，约1/3有全身性和局限性癫痫，短期内成为植物人（1.9+/-2年）。青春期ALD，起病介于10-21岁，症状类似儿童ALD，但进展慢，表现类似AMN，常伴有性功能障碍。

通常，该疾病的可靠诊断是培养纤维母细胞中显示极长链饱和脂肪酸（VLCFAS）浓度增高。产前诊断可作羊膜穿刺细胞培养，但VLCFAS检查技术上极其困难。CT扫描和MRI有较大价值，病变部位显示低密度，造影剂加强后低密度区邻近有花环状造影剂堆积。MRI较CT扫描更具有诊断价值。

分子生物学研究表明，X连锁性ALD是由于位于X染色体长臂28区的ABCD1基因发生突变。ABCD1基因由10个外显子和9个内含子组成，编码区序列长度为2238个碱基（如SEQ ID NO.1所示）。ABCD1基因编码的跨膜转运蛋白包括745个氨基酸（如SEQ ID NO.2所示），该蛋白的作用是将长链脂肪酸转运至过氧化物酶体。当ABCD1基因发生突变时，其编码的蛋白的一级序列可能发生改变，从而无法正常发挥作用，造成极长链饱和脂肪酸在脏器堆积，导致发病。

目前国内外均有多个中心可对ABCD1基因进行基因突变的检测，已发现400多种基因突变类型可导致X连锁隐性ALD，但大多数家系都具有同一种特殊的基因型。不同家系的表现型差异很大，这一特征与各种修饰基因或其它一些尚未了解清楚的因素有关。

发明内容

本发明的目的是提供一种导致肾上腺脑白质营养不良症的ABCD1基因的突变，并提供能够检测该突变的引物、探针、抗体、试剂盒等，从而为诊断肾上腺脑白质营养不良症提供一种新的方式。

本发明的第一个方面是提供一种ABCD1基因突变体，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。所述基因突变体是ABCD1基因的编码序列第657、658位的胞嘧啶缺失所形成的。

发明人通过基因测序的方法对ALD病患进行检测，发现该病患的ABCD1编码基因第657、658位胞嘧啶缺失，该位点位于ABCD1基因的第一外显子中。进一步分析其家庭成员的ABCD1基因序列，病患父亲的ABCD1基因正常，病患母亲的ABCD1基因为杂合子，是该突变的携带者，但母亲没有发病。该突变是首次在中国ALD病患中发现，之前未见文献报导，为检测和判断ALD病患提供一种新的方式。

本发明提供的基因突变体或包括缺失位点的基因突变体片段可以作为分子标记，在检测ABCD1编码基因是否存在突变时作为标准，供相关人员分析。

在一种优选的实施方式中，所述包括缺失位点的ABCD1基因突变体片段包含SEQ ID NO.3中的至少10个连续核苷酸，并且所述至少10个连续核苷酸包含SEQ ID NO.3的第656、657、658位核苷酸。这样的基因突变体片段的长度可以是10-700个核苷酸，例如20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650等任意长度。

在一种优选的实施方式中，所述包括缺失位点的ABCD1基因突变体片段是上述片段的反向互补序列。

由于本发明的ABCD1基因突变体缺失了两个胞嘧啶，导致其编码的氨基酸序列发生变化，无法翻译出能够行使正常功能的跨膜转运蛋白，从而导致发生ALD。

因此，本发明的第二个方面是提供一种多肽，所述多肽具有如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，所述氨基酸序列由SEQ ID NO.3的核苷酸序列编码。