[发明专利]一种人参PDR跨膜转运蛋白基因启动子及其应用

权利要求书

1.一种人参PDR跨膜转运蛋白基因启动子，其特征在于：所述启动子序列如SEQ ID NO.1所示，或是与SEQ ID NO.1具有99%以上同源性的DNA序列。

2.根据权利要求1所述的启动子，其特征在于：所述启动子包括ERE元件、TCA元件、TGACG-Motif和W-Box。

3.如权利要求1或2所述的启动子的制备方法，其特征在于依次为下列步骤：（1）提取人参根基因组总DNA，以人参根总DNA为模板，构建四个启动子文库：Dra I文库、EcoR V文库、Pvu II文库和Stu I文库；（2）分别以构建的Dra I文库、EcoR V文库、Pvu II文库和Stu I文库为模板，根据人参PgPDR2基因的5′端序列设计引物，进行PCR扩增；（3）胶回收PCR产物，该产物即得本发明所述的ProPDR2启动子。

4.根据权利要求3所述的启动子的制备方法，其特征在于：所述根据人参PgPDR2基因的5′端序列设计的引物包括外侧引物Pro3-SP和巢式引物Pro3-Nest-SP，外侧引物Pro3-SP如SEQ ID NO.2所示，巢式引物Pro3-Nest-SP如SEQ ID NO.3所示。

5.含有权利要求1或2所述的启动子的重组载体，其特征在于：所述重组载体为pBI121-ProPDR2::GUS，所述空载体为pBI121载体，在ProPDR2启动子的下游连接GUS报告基因。

6.如权利要求5所述的重组载体的构建方法，其特征在于依次为下述步骤：（1）根据启动子序列设计片段相对应的包含Hind III/Bam HI酶切位点的特异性引物，分别用Bam HI和Nco I双酶切pBI121和启动子ProPDR2，回收pBI121载体和ProPDR2启动子片段；（2）将pBI121和ProPDR2两片段连接并转化DH5α；（3）通过卡那霉素筛选、PCR和Bam HI/Nco I双酶切鉴定，即获得所述重组载体pBI121-ProPDR2::GUS。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：在所述步骤（1）中根据启动子序列设计片段相对应的包含Hind III/Bam HI酶切位点的特异性引物如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：步骤（3）中PCR鉴定的引物对如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。

9.根据权利要求1或2所述的启动子ProPDR2在调控人参皂苷转运积累和人参育种中的应用。

10.根据权利要求5所述的的重组载体pBI121-ProPDR2::GUS在调控人参皂苷转运积累中和人参育种中的应用。