[发明专利]应用腺病毒载体介导RNA干扰技术沉默固醇调控元件结合蛋白基因1的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种应用腺病毒载体介导RNA干扰技术沉默固醇调控元件结合蛋白基因1（SREBP1）的方法 

背景技术

固醇调节元件结合蛋白（Sterol regμlatory element binding proteins：SREBPs）是一种膜结合蛋白，属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子家族，它主要通过促进糖酵解和脂肪生成而在能量平衡中发挥重要作用（Eberle et al.，2004；Shimomura et al.，1997；Wang et al.，1994）研究已经表明SREBPs家族是通过结合下游基因（包括SCD）启动子中的SRE（5’-TCACNCCAC-3’）序列来调控基因的转录（Shimano，2001）。SREBP-1c能够促进PPARγ的表达和内源性PPARγ的产生，并与PPARγ和CCAAT增强子结合蛋白（CCAAT enhancer binding protein，C/EBPs）共同调控脂肪细胞分化（Kim et al.，1998）。过表达SREBP-1c增加了3T3-L1前体脂肪细胞中脂肪酸合酶（fatty acid synthase，FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（acetyl CoA carboxylase，ACC）等脂肪沉积相关基因的表达，从而促进脂肪细胞分化（Kim and Spiegelman，1996）。SREBP-1c（-/-）小鼠在正常饲喂条件下，肝脏中由多种mRNAs编码的脂肪酸合酶及甘油三酯合酶的含量减少，主要包括乙酰辅酶A羧化酶和脂肪酸合成酶（Liang et al.，2002）。研究还发现该基的不同突变体对大多不饱和脂肪酸含量和肌内脂肪熔点均有显著的影响（Hoashi et al.，2007）。同时该基还可能是影响中国肉牛生长发育的一个重要基因（Huang et al.，2011）。 

RNAi（RNA interference，RNAi）是一种双链RNA分子在mRNA水 平关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程，也就是序列特异性的转录后基因沉默，是研究基因功能的一种的重要手段。在大多数情况下，针对某一特定基因设计的shRNA并不能达到沉默该基因的效果（Elbashir et al.，2002a；Holen et al.，2002；KapadiaBrideau-Andersen and Chisari，2003；Lee et al.，2002；YuDeRuiter and Turner，2002），一般只有1/5能起到有效沉默目的基因的效果（KapadiaBrideau-Andersen and Chisari，2003；McManus et al.，2002）。 

以下是发明人给出的参考文献： 

1、Eberle，D，Hegarty，B，Bossard，P，Ferre，P，etal.（2004）.SREBP transcription factors:master regulators of lipid homeostasis.Biochimie86，839-848；Elbashir，SM，Harborth，J，Weber，K，Tuschl，T（2002a）.Analysis of gene function in somatic mammalian cells using small interfering RNAs.Methods26，199-213。 

2、Elbashir，SM，Harborth，J，Weber，K，Tuschl，T（2002b）.Analysis of gene function in somatic mammalian cells using small interfering RNAs.Methods26，199-213。 

3、Hitt，DC，Booth，JL，Dandapani，V，Pennington，LR，et al.（2000）.A f1ow cytometric protocol for titering recombinant adenoviral vectors containing the green fluorescent protein.Mol Biotechnol14，197-203。