[发明专利]一种同步检测14种抗肿瘤用药相关基因表达水平的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗肿瘤用药相关基因表达水平的试剂盒及其检测方法，尤其是涉及一种基于GeXP多重基因表达遗传分析系统的同步检测14种抗肿瘤用药相关基因表达水平的试剂盒及其检测方法。

背景技术

最近几年，药物遗传学/药物基因组学在抗肿瘤药物作用机制等方面的研究获得了突破性进展，发现某些抗肿瘤药物对肿瘤细胞的杀伤效应与特定的一种（或一组）基因的表达和/或多态性显著相关。通过相关基因的检测，预测化疗及靶向药物的疗效，选择合适的药物进行个体化化疗，已经成为提高疗效、减少无效治疗的合理选择。

个体化治疗是根据患者的遗传学特点，采用特异和最佳的药物方案进行治疗的方法。大量临床数据表明，肿瘤组织中ERCC1/RRM1/TYMS/TUBB3等靶标基因mRNA表达水平可以分别预测患者对铂类/吉西他滨/氟尿嘧啶类/抗微管类等常用化疗药物的反应。根据患者肿瘤组织中mRNA表达水平的检测结果，制订个体化治疗方案，有助于选择适合患者的化疗药物，提高治疗的针对性。通过靶标检测选择化疗药物可以避免无效或有害的化疗、节省宝贵的治疗时间与治疗费用。

目前检测基因表达（mRNA水平）的方法主要为荧光定量PCR法。荧光定量PCR通过设计特异性的探针序列，经实时定量PCR对目的基因的表达水平进行定量检测。荧光定量PCR具有较高的灵敏度与准确性，可精确定量，操作简单快捷，是当前基因定量检测的主流方法。但是，荧光定量PCR的如下不足限制了它的市场应用：（1）通量低：一次反应只能检测一个基因，对于复杂的药物代谢和调控系统，需要检测多个位点时，就需要多台PCR仪同时工作，效率低，周期长。（2）多个位点检测成本较高：需要进行多个反应才能得到所需的基因表达信息，从而使总的检测成本较高。（3）难以设置内参基因：只能设置外控基因，无法有效的监测RNA质量及整个反应系统。

GenomeLab^TMGeXP多重基因表达遗传分析系统基于贝克曼公司成熟的毛细管电泳分离技术及高灵敏度的激光诱导荧光技术研发而成，一束8道的毛细管陈列设计充分利用了96孔板的排列特性，降低了使用更大的陈列带来的花费和复杂性。采用多重PCR方法，通过Beckman Coulter染色标记，在同一个EP管中同时分析多个基因的表达，能快速有效地检测基因的表达状况，克服了上述荧光定量PCR法存在的缺陷，具有以下优点：

1、高通量：本系统采用双（96孔）板、自动加样和样品追踪技术，实现单个反应检测30-40个位点，可同时做192个反应（如192个患者样品，每个样品检测30种腹泻病毒，30个位点），一天出结果；对于交叉感染患者，本方法可一次性给出准确报告，避免漏检。

2、准确性强：GeXP采用毛细管电泳对PCR产物进行分离检测，可将非特异性扩增产物、引物二聚体和特异性扩增产物分离，最大程度降低假阳性；

3、敏感性高，结果重复性好：GeXP系统克服了传统PCR扩增方法的不均等扩增造成的偏差，提高了对一套目的基因进行定量的速度和敏感性，采用激光诱导荧光-PMT，具有超高灵敏度；

4、方法简便，使用经济：GeXP提供从试剂、多重PCR引物设计、结果及定量表达谱分析等全套实验方案；每个样品的检测成本少于￥50，利于大规模推广；

5、精确定量、灵活性强：可精确定量病原体基因拷贝数，可随时根据需求调整检测的靶基因。

6、易于实现自动化：就样品制备而言，Biomek系列自动液体处理仪可以与GeXP分析仪和Ampligrid扩增仪完全匹配，集成的条形码阅读器保证了准确的样品追踪和结果报告。

目前，国内外还没有关于基于GeXP多重基因表达遗传分析系统的同步检测14种抗肿瘤用药相关基因表达水平的试剂盒及其检测方法的相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种特异性强、灵敏度高、通量高、可靠性强、成本低、无假阴性结果的基于GeXP多重基因表达遗传分析系统的同步检测14种抗肿瘤用药相关基因表达水平的试剂盒及其检测方法。