[发明专利]一种利用夹心法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡

权利要求书

1.一种利用夹心法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡，其特征在于，所述检测试纸卡由外壳(1)和其内部的试纸条(2)构成，外壳(1)由上板(3)和下板(4)构成，上板(3)有检测窗(5)和加样孔(6)，试纸条(2)由底板(7)和在底板(7)上依次粘贴的样品吸收垫(8)、胶体金标记垫(9)、检测反应区(10)构成，样品吸收垫(8)正对加样孔(6)，检测反应区(10)正对检测窗(5)。

2.根据权利要求1所述一种利用夹心法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡，其特征在于，所述胶体金标记垫(9)包被有牛布鲁氏菌抗原-胶体金标记物。

3.根据权利要求2所述一种利用夹心法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡，其特征在于，所述牛布鲁氏菌抗原-胶体金标记物的制备方法为：

(1)将牛布鲁氏菌抗原在0.005M/L pH7.0的NaCl溶液中4℃透析过夜，4℃，10000-12000rpm条件下离心1h；

(2)将OD526的胶体金溶液的pH调节至4.0-9.0；

(3)将步骤(1)离心得到的牛布鲁氏菌抗原用0.005M/L pH9.0的硼酸盐缓冲溶液稀释至5μg/ml～50μg/ml，取1ml稀释后的牛布鲁氏菌抗原加入到1ml胶体金溶液中，振荡混匀，静置5min，加入0.1ml10％的NaCl溶液，混匀后静置2h，离心纯化制得胶体金标记的牛布鲁氏菌抗原。

4.根据权利要求1所述一种利用夹心法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡，其特征在于，所述检测反应区(10)由包被牛布鲁氏菌抗原-载体蛋白偶联物的测试区(11)和包被牛布鲁氏菌抗体的质控区(12)组成。

5.根据权利要求4所述一种利用夹心法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡，其特征在于，所述牛布鲁氏菌抗原-载体蛋白偶联物的制备方法为：

(1)取5mg牛布鲁氏菌抗原和2.5mg载体蛋白溶解在250μl TE buffer中，充分震荡使其溶解，再取EDC·HCl79mg充分溶解于250μl TE buffer中；

(2)将牛布鲁氏菌抗原和载体蛋白的混合溶液边震荡边逐滴加入EDC·HCl溶液，在37℃摇床中反应2h以上；

(3)先用Sephadex柱分离步骤(2)反应后的偶联产物和未结合的牛布鲁氏菌抗原，再透析纯化，将0.5ml溶液在PBS中透析3d，每天换液两次，每次换液200ml，透析产物分装成20份，于-20℃保存，得到牛布鲁氏菌抗原-载体蛋白偶联物。

6.根据权利要求1所述一种利用夹心法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、血蓝蛋白或鸡卵白蛋白。

7.根据权利要求1所述一种利用夹心法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡，其特征在于，所述样品吸收垫含有植物凝集素或抗红细胞抗体。

8.根据权利要求7所述一种利用夹心法检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡，其特征在于，所述抗红细胞抗体为使用人红细胞免疫小鼠、羊或兔，常规制备的抗红细胞单克隆抗体。

9.应用权利要求1所述检测牛布鲁氏菌抗体的检测试纸卡的检测方法，其特征在于，按照如下步骤进行：

(1)血液样品处理：血液标本收集在洁净、干燥的容器内，将采集的新鲜血液加入浓度为2.5％抗凝剂；

(2)取经过处理的血液样品100μL，滴入加样孔；

(3)待血液样品流过测试区和质控区，判定样品中是否含有牛布鲁氏菌抗体，判定规则如下：

阴性(-)：仅质控区出现一条紫红色条带，在测试区内无紫红色条带出现；

阳性(+)：两条紫红色条带出现，一条位于测试区内，另一条位于质控区内；

无效：当质控区不显示出紫红色条带，则无论测试区显示出紫红色条带与否，该试纸卡判为无效。