[发明专利]用于修复周围神经损伤的细胞基质修饰的组织工程神经移植物及其制备方法

权利要求书

1.一种用于修复周围神经缺损的组织工程神经移植物，由神经导管和细胞基质构建而成，其特征在于所述细胞基质是自体的或同种异体来源细胞分泌形成后脱细胞而获得。

2.如权利要求1所述的组织工程神经移植物，其特征在于所述细胞是施万细胞、皮肤来源的成纤维细胞、皮肤干细胞、骨髓间充质干细胞或诱导多潜能干细胞中的一种或几种。

3.如权利要求1所述的组织工程神经移植物，其特征在于所述神经导管由生物可降解材料构成，所述的生物可降解材料为丝素蛋白、壳聚糖、胶原、聚乳酸或聚羟基乙酸中的一种或几种。

4.如权利要求1-3之一所述的组织工程神经移植物的制备方法，其特征在于制备含支持细胞的组织工程神经移植物之后进行脱细胞处理得到含细胞自身分泌的细胞基质修饰的组织工程神经移植物。

5.如权利要求4所述的组织工程神经移植物的制备方法，其特征在与于所述含支持细胞的组织工程神经移植物采用三维微重力旋转培养得到。

6.如权利要求5所述的组织工程神经移植物的制备方法，其特征在于含支持细胞的组织工程神经移植物的制备及去细胞组织工程神经移植物的构建具体为：

（1）含支持细胞的组织工程神经移植物的构建：将完全培养基缓慢注入培养容器，再加入2.5×10⁷个细胞及无菌处理过的神经导管，再将完全培养基注满整个容器，控制细胞最终密度为1×10⁵/ml，排尽系统内空气后，开始旋转微重力循环灌注培养；旋转式生物反应器放入37℃ CO₂培养箱中，前24小时转速为10转/分钟，使细胞与神经导管充分接触，贴附；24小时后调整旋转式生物反应器旋转速度，使神经导管能悬浮到培养液中；继续培养2天后更换为分化培养基培养，以促进细胞外基质分泌；培养2周后终止培养将表明贴附生长有细胞的神经导管取出；

（2) 含细胞自身分泌的细胞基质修饰的组织工程神经移植物的构建：将培养有细胞的组织工程神经移植物进行脱细胞处理， PBS清洗后去离子无菌水37 ℃低渗10 min；加入细胞抽提液于37℃裂解细胞10-15 min；PBS清洗3次后加入Dnase I (4 mg/ml)  37 ℃消化30 min去除DNA， -80 ℃保存备用。

7.如权利要求4-6之一所述的组织工程神经移植物的制备方法，其特征在于所述细胞是施万细胞、皮肤来源的成纤维细胞、皮肤干细胞、骨髓间充质干细胞或诱导多潜能干细胞中的一种或几种。

8.如权利要求4-6之一所述的组织工程神经移植物的制备方法，其特征在于所述神经导管由生物可降解材料构成，所述的生物可降解材料为丝素蛋白、壳聚糖、胶原、聚乳酸或聚羟基乙酸中的一种或几种。