[发明专利]一种苯并氮氧杂卓类抗生素及其制备方法

权利要求书

1.一种苯并氮氧杂卓类抗生素，其化学分子式为C₁₀H₁₁NO₁₃，其化学结构式如下式(I)所示：

式(I)。

2.一种制备上述权利要求1所述的式(I)的苯并氮氧杂卓类抗生素的生物合成方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤一：发酵

(1)发酵菌种：发酵菌株是在中国山东半岛农药污染地区采集土样，在实验室分离培养获得，鉴定为雅加达链霉菌(Sereptomyces djakartensis)；该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期为2012年11月13日，保藏登记号为CGMCC No.6817；

(2)斜面培养：采用淀粉酪素培养基于1×10⁵帕下灭菌30min，接菌后28-32℃培养4-5d；所述淀粉酪素培养基由如下组分组成：可溶性淀粉10.0g，磷酸氢二钾2.0g，硝酸钾2.0g，氯化钠2.0g，酪蛋白0.3g，7水硫酸镁0.05g，碳酸钙0.02g，7水硫酸亚铁0.01g，琼脂20.0g蒸馏水1000ml，PH值7.2-7.4；

(3)种子培养：将种子培养基分装于250ml三角瓶，每瓶20-100ml，于1×10⁵帕下灭菌30min；用无菌水将斜面上孢子洗下制成孢子悬浮液，使其浓度为1×10⁶-×10⁷个/ml；每瓶加0.5-2.0ml孢子悬浮液，置于转速为150-180r/min的摇床上，28-32℃培养24-36h；所述种子培养基由如下组分组成：小米10-30g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒，加入葡萄糖15-30g，氯化钠2-5g，蛋白胨2-10g，碳酸钙0.2-0.8g，硫酸铵0.5-2.5g，PH值7.2-7.4；

(4)液体发酵：将发酵培养基分装于250ml三角瓶，每瓶20-100ml，于1×10⁵帕下灭菌30min；接种量10％(V/V)，置于转速为150-240r/min的摇床上，28-32℃培养4-6d；所述发酵培养基为小米10-30g加蒸馏水1000ml煮沸15min后滤去米粒，加入葡萄糖15-30g，氯化钠2-5g，蛋白胨2-10g，碳酸钙0.5-2.5g，硫酸铵1-3g，PH值7.2-7.4；

步骤二：抗生素的分离

(1)将步骤一制得的发酵液经100-200目筛网过滤后，用HPD大孔吸附树脂吸附，甲醇-水梯度洗脱；

(2)将甲醇洗脱液浓缩后进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯/甲醇(v/v)

9∶1，8∶2，7∶3，6∶4和纯甲醇依次洗脱，收集以乙酸乙酯/甲醇(v/v)9∶1的流分，浓缩后放置过夜，析出抗生素粗结晶；

(3)将上述粗结晶用制备高效液相色谱纯化，得到式(I)所示的苯并氮氧杂卓抗生素纯品。

3.一种制备权利要求1所述的式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法，其特征在于：

先将邻氨基苯甲酸甲酯与缩水甘油进行氨开环氧反应，然后碱性水解，最后调成弱酸性环合得到目标产物。

4.一种制备权利要求1所述的式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法，其特征在于：

先将Boc保护的邻氨基苯甲酸与缩水甘油进行酯化反应，然后酸性脱除Boc保护基，并在酸性条件下氨开环氧合得到目标产物。

5.一种制备权利要求1所述的式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法，其特征在于：

先将Boc保护的邻氨基苯甲酸与烯丙基溴进行酯化反应，然后间氯过氧苯甲酸将双键环氧化，最后酸性脱除Boc保护基，并在酸性条件下氨开环氧得到目标产物。

6.一种制备权利要求1所述的式(I)所示的苯并氮氧杂卓类抗生素的化学合成方法，其特征在于：

先将邻氨基苯甲酸甲酯与二羟基丙酮进行反应，得到亚胺，将亚胺氢化还原后碱性水解，最后调成弱酸性环合得到目标产物。