[发明专利]人白细胞介素29成熟肽第33位赖氨酸、35位精氨酸定点突变为精氨酸、赖氨酸的变异体及其制备方法

权利要求书

1.一种人白细胞介素29(hIL-29)成熟肽变异体的重组真核表达载体，其特征在于，所述的重组真核表达载体中插入了人工定点突变的人白细胞介素29变异体的编码基因。

2.如权利要求1所述的重组真核表达载体中的hIL-29变异体的编码基因，其DNA的核苷酸序列对应于序列表中的SEQ ID NO：1，该序列中第98位碱基由A(腺嘌呤)突变为G(鸟嘌呤)，由该碱基组成的三联体密码由AAG突变为AGG；该序列中第104位碱基由G(鸟嘌呤)突变为A(腺嘌呤)，由该碱基组成的三联体密码由AGG突变为AAG。

3.如权利要求1所述的重组真核表达载体中的hIL-29突变体编码基因的编码产物，其氨基酸序列对应于序列表中的SEQ ID NO：2，该序列中第33位氨基酸由赖氨酸(Lys)突变为精氨酸(Arg)、第35位氨基酸由精氨酸(Arg)突变为赖氨酸(Lys)。

4.一种重组毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述的重组毕赤酵母的染色体中整合有权利要求1所述的人工定点突变的hIL-29突变体的编码基因，并且分泌表达hIL-29突变体至培养液中。

5.一种制备人白细胞介素29突变体的方法，其特征在于，包括步骤：

(1)用适当的培养液，培养权利要求4所述的重组毕赤酵母工程菌；

(2)在培养液中添加适当的诱导剂，诱导重组毕赤酵母工程菌分泌表达重组白细胞介素29突变体；

(3)从培养液中分离纯化出重组毕赤酵母分泌表达的hIL-29突变体。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)所用的培养液为BMGY培养液和BMMY培养液；步骤(2)所用的诱导剂为甲醇，添加甲醇的终浓度为培养液体积的1.5％；步骤(3)所用的分离纯化hIL-29突变体的方法为用强阳离子型SP离子交换层析分离培养液中的hIL-29突变体。