[发明专利]一种酶合成胸腺五肽的方法

权利要求书

1.一种酶合成胸腺五肽的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）叔丁氧羰基-缬氨酸-酪氨酸-甲酯二肽的合成：将0.2～0.8mol/L pH5.0～8.0三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液加入乙酸乙酯中，搅拌均匀，然后按质量比4～10：40～55：20～35依次加入木瓜蛋白酶、叔丁氧羰基-缬氨酸和酪氨酸-甲酯，于30～60℃反应12～48h，得到叔丁氧羰基-缬氨酸-酪氨酸-甲酯二肽；

（2）[叔丁氧羰基-精氨酸（2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基）-赖氨酸-甲酯]二肽的合成：将0.6～1.2mol/L pH4.0～7.0三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液加入乙酸乙酯中，搅拌均匀，然后按质量比4～10：45～55：40～55依次加入木瓜蛋白酶、[叔丁氧羰基-精氨酸(2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基)]和赖氨酸-甲酯，于30～60℃反应36～72h，得到[叔丁氧羰基-精氨酸（2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基）-赖氨酸-甲酯]二肽；

（3）[叔丁氧羰基-精氨酸（2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基）-赖氨酸-天冬氨酸-甲酯]三肽的合成：将0.2～0.8mol/L pH5.0～8.0三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液加入乙酸乙酯中，搅拌均匀，然后按质量比3～10：2～7：4～10依次加入木瓜蛋白酶、[叔丁氧羰基-精氨酸（2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基）-赖氨酸]和天冬氨酸-甲酯，于30～60℃反应36～72h，得到[叔丁氧羰基-精氨酸（2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基）-赖氨酸-天冬氨酸-甲酯]三肽；

（4）精氨酸-赖氨酸-天冬氨酸-缬氨酸-酪氨酸五肽的合成：将0.2～0.8mol/LpH5.0～8.0三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液加入乙酸乙酯中，搅拌均匀，然后按质量比2～6：4～10：4～10依次加入木瓜蛋白酶、[叔丁氧羰基-精氨酸（2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基）-赖氨酸-天冬氨酸]和缬氨酸-酪氨酸-甲酯，于30～60℃反应36～72h，得到混合物；将混合物处理后，得到精氨酸-赖氨酸-天冬氨酸-缬氨酸-酪氨酸五肽。

2.根据权利要求1所述的酶合成胸腺五肽的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的0.2～0.8mol/L pH5.0～8.0三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液与乙酸乙酯体积比为0.5～2：1。

3.根据权利要求1所述的酶合成胸腺五肽的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的0.6～1.2mol/L pH4.0～7.0三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液与乙酸乙酯的体积比为0.05～0.2：1。

4.根据权利要求1所述的酶合成胸腺五肽的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的0.2～0.8mol/L pH5.0～8.0三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液与乙酸乙酯的体积比为0.05～0.2：1。

5.根据权利要求1所述的酶合成胸腺五肽的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的0.2～0.8mol/L pH5.0～8.0三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液与乙酸乙酯的体积比为0.05～0.2：1。

6.根据权利要求1所述的酶合成胸腺五肽的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的叔丁氧羰基-缬氨酸-酪氨酸-甲酯二肽的合成采用以下方法进行：将0.2～0.6mol/L pH5.0～7.0三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液加入乙酸乙酯中，搅拌均匀，然后按质量比8：44：23依次加入木瓜蛋白酶、叔丁氧羰基-缬氨酸和酪氨酸-甲酯，于40～60℃反应12～48h，得到叔丁氧羰基-缬氨酸-酪氨酸-甲酯二肽。

7.根据权利要求1所述的酶合成胸腺五肽的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的[叔丁氧羰基-精氨酸（2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基）-赖氨酸-甲酯]二肽采用以下方法进行合成：将0.8～1.0mol/L pH4.0～7.0三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液加入乙酸乙酯中，搅拌均匀，然后按质量比4～8：53：46依次加入木瓜蛋白酶、[叔丁氧羰基-精氨酸(2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基)]和赖氨酸-甲酯，于50～60℃反应48～72h，得到[叔丁氧羰基-精氨酸（2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基）-赖氨酸-甲酯]二肽。