[发明专利]一种聚乙二醇修饰的rhG-CSF注射液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种聚乙二醇修饰的rhG-CSF注射液及其制备方法。 

背景技术

粒细胞集落刺激因子(Granulocyte Colony Stimulating Factor，G-CSF)是刺激骨髓细胞集落形成的集落刺激因子之一，它能够特异性地刺激和调节粒细胞系统的增殖、分化、存活和活化，对于各种原因引起的中性粒细胞减少症具有潜在的、巨大的应用价值.但是重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在体内循环半衰期短，t1/2仅为1.3～4.2h，作用时间短暂，需天天注射，限制了疗效。 

2002年FDA批准美国Amgen公司用PEG-rhG-CSF(通用名pegfilgrastim，商品名Neulasta)治疗中性粒细胞减少症，只需两周注射1次，大大提高了患者临床用药的顺应性。 

Neulasta是以0.6mL的预充式注射器形式提供的。每支注射器中包含6mg的PEG-rhG-CSF、0.35mg醋酸、30.0mg山梨醇、0.02mg的吐温20和0.02mg的钠，pH为4.0。Neulasta采用预充式注射器形式包装，成本高，患者临床用药顺应性差，且造成资源浪费，不利于环保。 

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种成本低廉且性质稳定的聚乙二醇修饰的rhG-CSF注射液，来提高患者临床用药的顺应性。 

玻璃瓶或塑料瓶为小容量注射液常用的包装容器，相较于预充式注射器，成本低廉。本发明人尝试将Neulasta采用玻璃瓶或塑料瓶包装，但经过模拟运输稳定性试验发现，这两种包装下的Neulasta注射剂不稳定，出现蛋白质沉淀，活性明显降低，不再适合临床应用。 

为了得到稳定的聚乙二醇修饰的rhG-CSF注射剂，本发明人对处方工艺进行了大量试验，发现在这两种包装容器中，当每毫升注射液含mPEG₂₀₀₀₀-rhG-CSF的量(蛋白质浓度)为 

1～8mg，所含稳定剂为吐温80时，稳定性显著提高，不再出现蛋白质沉淀，活性提高到标准值5.0×10⁷(IU/mg)以上。为了得到了更为稳定、活性更高的聚乙二醇修饰的rhG-CSF注射剂，本发明人对每毫升注射液含mPEG₂₀₀₀₀-rhG-CSF的量及吐温80的用量，以及其它药用辅料的种类及用量进行了更为细微的考察，发现： 

①当每毫升注射液中含mPEG₂₀₀₀₀-G-CSF的量为2～5mg时，制剂稳定性更高。从稳定性、 制剂成本、患者用药方便等多方面综合考虑，每毫升注射液中含mPEG₂₀₀₀₀-rhG-CSF的量为3mg时，为最佳蛋白质浓度。 

②当每毫升注射液中含吐温80的量为0.02～0.05mg时，制剂稳定性更高；当每毫升注射液中含吐温80的量为0.04mg时，制剂稳定性最高。 

③等渗剂的种类对mPEG₂₀₀₀₀-rhG-CSF注射剂的稳定性也有一定影响。当等渗剂为山梨醇或甘露醇时，制剂稳定性较佳；当等渗剂为山梨醇时，制剂稳定性最佳；当等渗剂为其它等渗剂时，mPEG₂₀₀₀₀-rhG-CSF注射剂的稳定性降低。 

因此，本发明一方面提供了一种聚乙二醇修饰的rhG-CSF注射液，每毫升注射液由mPEG₂₀₀₀₀-rhG-CSF、稳定剂、等渗剂、pH3.5～4.5的缓冲液及注射用水组成，其特征在于，每毫升注射液中含mPEG₂₀₀₀₀-G-CSF的量为1～8mg，所述稳定剂为吐温80。 

其中： 

每毫升注射液中含mPEG₂₀₀₀₀-G-CSF的量优选为2～5mg，更优选为3mg。 

每毫升注射液中含稳定剂的量为0.02～0.05mg，优选为0.04mg； 

所述等渗剂优选为5％的山梨醇或甘露醇。 

所述缓冲液为醋酸钠-醋酸缓冲液。 

进一步地，本发明提供一种聚乙二醇修饰的rhG-CSF注射液，每毫升注射液由以下组分组成： 

更进一步地，本发明提供一种聚乙二醇修饰的rhG-CSF注射液，每毫升注射液由以下组分组成： 

另一方面，本发明还提供一种上述的聚乙二醇修饰的rhG-CSF注射液的制备方法，包括如下步骤：