[发明专利]高纯度质粒DNA制备物及其制备方法

权利要求书

1.一种用于纯化质粒DNA的方法，所述方法包括使用多肽处理含有质粒DNA的含水组合物以消化荚膜异多糖酸，然后将质粒DNA从经处理的含水组合物中分离；

优选地，所述含水组合物选自粗细菌裂解液、部分纯化的细菌裂解液以及含有提取的细菌核酸的含水溶液；

优选地，所述含水组合物为粗细菌裂解液；

优选地，所述含水组合物为部分纯化的细菌裂解液；或者

优选地，所述含水组合物为含有提取的细菌核酸的含水溶液。

2.权利要求1的方法，其中，所述分离包括将所述经处理的含水组合物与层析材料组合；

优选地，所述层析材料选自阴离子交换层析树脂、阳离子交换层析树脂、疏水相互作用层析树脂及亲和层析树脂；或者

优选地，所述分离包括将所述经处理的含水组合物与亲和层析树脂组合，随后将经处理的含水组合物与疏水相互作用层析树脂组合；更优选地，所述亲和层析树脂包括基于硼酸的或者含有硼酸盐的化合物。

3.权利要求1或2的方法，其中，在使用多肽处理之前预处理所述含水组合物以从含水组合物中部分去除内毒素，所述预处理包括将所述含水组合物与层析材料组合；

优选地，所述层析材料为阴离子交换树脂；以及

更优选地，所述阴离子交换树脂包括季铵树脂。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其进一步包括过滤所述含水组合物以进一步从质粒DNA中分离内毒素；

优选地，所述过滤在从层析材料洗脱经处理的含水组合物之后进行。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中，所述多肽为重组多肽。

6.权利要求1的方法，其中，在使用多肽处理之前预处理所述含水组合物以从含水组合物中部分去除内毒素，所述预处理包括将所述含水组合物与层析材料组合；在使用多肽处理后与亲和层析树脂组合，随后与疏水相互作用层析树脂组合；以及在将质粒DNA从所述疏水相互作用层析树脂上洗脱后，过滤以进一步从质粒DNA中分离内毒素。

7.权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，所述多肽包含与SEQ IDNO:1或者SEQ ID NO:2及其保守的氨基酸取代具有至少90%同源性的氨基酸序列；

优选地，所述多肽包含与SEQ ID NO:1或者SEQ ID NO:2及其保守的氨基酸取代具有至少98%同源性的氨基酸序列；

更优选地，所述多肽为SEQ ID NO:1或者SEQ ID NO:2。

8.权利要求1的方法，其中，所述质粒DNA为革兰氏阴性细菌质粒DNA。

9.一种用于纯化质粒DNA的方法，所述方法包括：

（a）通过将含水组合物与阴离子交换树脂组合预处理含有质粒DNA的含水组合物；

（b）使用多肽处理所述经预处理的含水组合物以消化荚膜异多糖酸；

（c）将所述质粒DNA从经处理的含水组合物中分离，该分离包括将经处理的含水组合物与亲和层析树脂组合，随后将经处理的含水组合物与疏水相互作用层析树脂组合；以及

（d）过滤所述质粒DNA；

优选地，所述阴离子交换树脂包括季铵树脂；

优选地，所述亲和层析树脂包括基于硼酸的或者含有硼酸盐的化合物；

优选地，所述多肽包含与SEQ ID NO:1或者SEQ ID NO:2及其保守的氨基酸取代具有至少90%同源性的氨基酸序列；更优选地，所述多肽包含与SEQ ID NO:1或者SEQ ID NO:2及其保守的氨基酸取代具有至少98%同源性的氨基酸序列；再更优选地，所述多肽为SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；

优选地，所述质粒DNA为革兰氏阴性细菌质粒DNA；或者

优选地，所述多肽为重组多肽。

10.一种多肽，其包含与SEQ ID NO:1及其保守的氨基酸取代具有至少90%同源性的氨基酸序列；

优选地，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:1及其保守的氨基酸取代具有至少95%同源性；

更优选地，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:1及其保守的氨基酸取代具有至少98%同源性；

再更优选地，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:1及其保守的氨基酸取代具有至少99%同源性；

具体地，所述氨基酸序列为SEQ ID NO:1。