[发明专利]从三裂叶蟛蜞菊中分离制备对映贝壳杉烷-16-烯-19-酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药用植物有效成分提取技术领域，特别涉及一种从三裂叶蟛蜞菊中分离制备对映贝壳杉烷-16-烯-19-酸的方法。

背景技术

对映贝壳杉烷-16-烯-19-酸（ent-KA）最早是从墨西哥传统的抗生育草药Montanoa tomentosa（Zoapatle）中分离得到，参见文献：Journal of ethnopharmacology (1986), 18(1), 89-94。曾有文献报道，化合物ent-KA 对人体鼻咽癌细胞（KB）和胃癌细胞（BGC-823）有很强的毒性，参见文献：（1）Phytotherapy Research (2002), 16, 387–388 和（2）黑龙江医药(2006), 19, 26-27。该化合物和其衍生物有很大的抗肿瘤研究价值和应用前景。现已经有文献披露从其它一些植物中也可分离得到这种物质，但含量都很少。所以从生长繁殖能力强的植物中以较高的提取率来提取该化合物成为研究的热点。

三裂叶蟛蜞菊即南美蟛蜞菊（Wedelia trilobata）为菊科（Compositae）蟛蜞菊属（Wedelia）植物，多年生草本，原产热带美洲，群落中很少有其它杂草，具有极强的入侵性，已经在许多热带、亚热带地区形成危害，被列为“世界上最有害的外来入侵物种”之一。生性强健，绿化迅速，能抑制杂草生长，常长大片生长。繁殖容易，摘取茎叶扦插即可成活。国内外曾经对南美蟛蜞菊的化学成分进行研究，发现对映贝壳杉烷-16-烯-19-酸是其主要活性成分。但常规的提取方法得到的产品纯度较低、收率较低、操作麻烦、生产工艺周期长、且重复性差，不利于大规模生产，不能满足市场需求。

超临界流体萃取是使用高于临界温度、临界压力的流体作为溶剂的萃取过程。处于临界点附近的流体不仅对物质具有极高的溶解能力，而且物质的溶解度随体系的压力或温度的变化而变化，从而通过调节体系的压力或温度就可方便地进行选择性地萃取分离物质。超临界萃取被视为环境友好且高效节能的新的化工分离技术在很多领域得到广泛重视和开发。在溶剂分离与回收方面超临界萃取优于一般液—液萃取和精馏，被认为是萃取速度快、效率高、能耗少的先进工艺。超临界流体萃取在中草药及天然产物提取分离方面具有低温、快速、收率高、产品纯天然等特点。该技术对实现中药现代化具有重要的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种萃取速度快、效率高、能耗少的从三裂叶蟛蜞菊中分离制备对映贝壳杉烷-16-烯-19-酸的方法，获得的产品收率高、纯度高。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种从三裂叶蟛蜞菊中分离制备对映贝壳杉烷-16-烯-19-酸的方法，将三裂叶蟛蜞菊干燥，粉碎，过筛，称取三裂叶蟛蜞菊粉末200-300g装入超临界萃取仪的萃取釜中，夹带剂选用60-95 wt%乙醇，控制萃取压力为20-25 MPa，萃取温度为40-60℃，CO₂流量为30-40L/h，萃取时间2-3h；然后减压浓缩去除乙醇得到总浸膏（40-50g），总浸膏溶于100-200ml水中，用100-200ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，有机相减压浓缩去除乙酸乙酯得到浸膏（20-30g），浸膏上D101型大孔吸附树脂，用50-60wt%乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩获得粗晶，粗晶用石油醚重结晶，即得对映贝壳杉烷-16-烯-19-酸。

本发明针对三裂叶蟛蜞菊本身特性，开发适合的工艺，采用二氧化碳临界萃取技术来提取三裂叶蟛蜞菊的有效成分对映贝壳杉烷-16-烯-19-酸，所用溶剂二氧化碳具有无毒、无味、不燃、不腐蚀、价格便宜、易于精制等优点。与传统溶剂提取法相比，步骤相对少，流程短，操作参数也易于控制，是产品质量稳定且无有害溶剂的残留；不仅萃取效率高、能耗低，而且萃取物杂质减少、有效成分高度富集。提取过程中通过使用60-95 wt%乙醇作为夹带剂，增加了对目标化合物提取的选择性和效率。采用D101型大孔吸附树脂脱色处理与已有硅胶柱层析提纯的技术相比，具有工艺步骤相对少，流程短，填料成本低，溶剂用量少等优点。

控制洗脱时，乙醇水溶液浓度为50-60wt%，该浓度洗脱液下的目标产物（即对映贝壳杉烷-16-烯-19-酸）收率高，且受杂质成分干扰最少。

作为优选，所述夹带剂的流速是10-12ml/min，夹带剂加入量是1000-1200ml。控制夹带剂的流量和加入量，提高了对目标化合物提取的选择性和效率。

作为优选，浸膏与树脂的质量比为1:5-10。这样分离纯化效果好。