[发明专利]抑制MAG基因表达的siRNA及重组载体有效
| 申请号： | 201310001411.8 | 申请日： | 2011-10-21 |
| 公开（公告）号： | CN103122349A | 公开（公告）日： | 2013-05-29 |
| 发明（设计）人： | 严望军;刘铁龙;肖建如;袁文;贾连顺 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第二军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 巫蓓丽 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抑制 mag 基因 表达 sirna 重组 载体 | ||
1.一种抑制MAG基因表达的siRNA，其特征在于，所述siRNA的核苷酸序列选自：
a）如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；或
b）与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
2.一种下调MAG基因表达的siRNA分子，其特征在于，所述的siRNA分子包含以下序列：
正义链：AATACTATTTCCGAGGTGACCgtgtgctgtccGGTCACCTCGGAAATAGTATT；
反义链：AATACTATTTCCGAGGTGACCggacagcacacGGTCACCTCGGAAATAGTATT。
3.一种同时抑制Nogo A、MAG和Omgp基因表达的重组载体，其特征在于，它是由下列方法构建得到的：
（a）单个siRNA干扰载体的构建：将SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14，SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16，SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示的序列分别退火冷却获得带BspMI位点的双链DNA，再分别与BspMI酶切质粒pcPUR-U6得到的较大片段连接，转化，筛选阳性克隆，测序验证，得到单个siRNA干扰载体pcPUR-U6+NogoA-4、pcPUR-U6+MAG-1和pcPUR-U6+OMgp-3；
（b）多基因特异siRNA载体系统的构建：BamHI、SacI双酶切pcPUR-U6+MAG-1载体，BglII、SacI双酶切pcPUR-U6+NogoA-4载体，均回收含U6启动子和siRNA的片段，连接，转化，验证，得到pcPUR-U6+MAG-1-U6+NogoA-4载体，BamHI、SacI双酶切pcPUR-U6+MAG-1-U6+NogoA-4载体回收较大片段，与BglII、SacI双酶切pcPUR-U6+OMgp-3载体回收的包含U6启动子和siRNA的片段连接，转化，验证，获得多基因特异siRNA载体pcPUR-U6+MAG-1-U6+NogoA-4-U6+OMgp-3。
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