[发明专利]纤维环与髓核一体化复合双相支架及其构建方法

权利要求书

1.一种纤维环与髓核一体化复合双相支架，其特征在于：该双相支架的外周是松质骨制备的脱细胞脱钙骨基质明胶环，中央是髓核组织制备的脱细胞髓核基质。

2.按照权利要求1所述纤维环与髓核一体化复合双相支架，其特征在于：所述的松质骨是猪股骨头松质骨。

3.按照权利要求1所述纤维环与髓核一体化复合双相支架，其特征在于：所述的髓核组织是猪尾髓核。

4.如权利要求1所述一种纤维环与髓核一体化复合双相支架的构建方法，其是以下步骤构建的：

a、制备脱细胞脱钙骨基质明胶环

取猪股骨头的松质骨，修整成纤维环形状后，依次在室温条件下进行脱细胞脱钙处理：

（1）、用体积比为1:1的氯仿甲醇混合液与松质骨按1g/30ml的比例浸泡24h；       

（2）、用0.6mol/L的HCl浸泡48h；

（3）、2 mmol/L CaCl₂浸泡1h；

（4）、0.5 mmol/L EDTA浸泡1h；

（5）、8 mmol/L的LiCl浸泡1h；

（6）、5% Triton X-100浸泡24h；

（7）、去离子水反复冲洗，即得；

b、制备脱细胞髓核基质微丝悬液

（1）、将猪尾椎间盘髓核组织放入含0.6%TritonX-100和1.0%脱氧胆酸的Tris－HCL缓冲液中，超声频率42 kHz±6%，处理10分钟，过滤去除骨屑杂质；

（2）、放入含0.6%TritonX-100和1.0%脱氧胆酸的Tris－HCL缓冲液中，室温持续震荡72h，150r/min，每隔24h换液一次、超声10分钟，去离子水冲洗干净；

（3）、将髓核组织用含720mU/mL DNaseⅠ和720mU/mL RNase A的PBS消化液37℃消化48小时，去离子水冲洗干净；

（4）、粉碎、梯度离心，取直径为100nm～5μm左右的髓核基质微丝，蒸馏水反复冲洗，与双蒸水按重量百分比配成0.5％～5％的白色乳悬液；

c.支架构建和交联

将脱细胞髓核基质微丝悬液注入到脱细胞脱钙骨基质明胶环中央，渗透深度0.5～2mm，-20℃～-80℃,1～48小时冷冻冻干后构成脱细胞髓核基质,先行紫外线照射交联，紫外线波长258nm，距离光源5～10cm，交联时间12～48h；然后化学试剂交联，浓度为0.001～1M的碳化二亚胺与浓度为0.001～1M的N-羟基琥珀酰亚胺混合的水溶液中交联1h～48h，再次冻干，消毒即得。

5.按照权利要求4所述纤维环与髓核一体化复合双相支架的构建方法，其特征在于：化学试剂交联是由浓度为0.01～0.3M的碳化二亚胺与浓度为0.005～0.2M的N-羟基琥珀酰亚胺混合的水溶液。