[发明专利]制备用于药物递送的脂质纳米颗粒的方法

权利要求书

1.一种制备包裹双链RNA分子的脂质纳米颗粒的方法，所述方法包括以下步骤：

制备脂质溶液，其包含溶于乙醇中的阳离子脂质、DOPE、甾醇和PEG脂质；

制备第一水溶液，其包含0.08-0.8mg/ml的所述RNA分子和pH 4-6的水性缓冲液；

以恒定速率在1-100分钟内，通过浸入注射将所述脂质溶液通过管泵入容器中包含的水溶液，从而所述脂质溶液与所述水溶液混合以制备包含25-45％v:v有机溶剂和脂质纳米颗粒的混合物，所述脂质纳米颗粒具有0.06-0.16w:w的RNA:脂质比例以及2.5:1-1:1的RNA:脂质电荷比例，在添加所述脂质溶液的同时，通过搅拌、振荡或再循环来混合所述容器中所得的混合物；以及

相对于pH 6-8的第二水性缓冲溶液进行渗滤，由此从所述混合物去除所述有机溶剂。

2.权利要求1的方法，其中所述第一水溶液还包含多糖。

3.权利要求2的方法，其中所述多糖选自蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖和菊粉。

4.权利要求1的方法，其还包括冷冻干燥所述包裹RNA分子的脂质纳米颗粒的步骤。

5.权利要求1的方法，其中所述阳离子脂质为所述脂质的40-60摩尔％。

6.权利要求1的方法，其中所述阳离子脂质选自HEDC、HEDODC和HE-Et-DODC：

7.权利要求1的方法，其中所述阳离子脂质由可电离或不可电离的正电荷组成。

8.权利要求1的方法，其中所述脂质还包含一种含类视黄醇分子的化合物。

9.权利要求1的方法，其中所述脂质溶液和所述第一水溶液处于25-55℃。

10.权利要求1的方法，其中所述第一水溶液包含柠檬酸盐。

11.一种药物制剂，其包含通过权利要求1-10中任一项的方法制备的包裹双链RNA分子的脂质纳米颗粒，其中所述阳离子脂质由结构式I组成：

其中

Z为烷基接头，C₂-C₄烷基；

Y为烷基接头，C₁-C₆烷基；

R₁和R₂互相独立地为C₁₂-C₃₀烷基或C₁₂-C₃₀烯基；

R₃和R₄互相独立地为氢、C₁-C₆烷基或-CH₂CH₂OH；

n为1-6；

X为反荷离子；并且

其中所述药物制剂包含多糖。

12.权利要求11的药物制剂，其中所述阳离子脂质为所述脂质的40-60摩尔％。

13.权利要求11的药物制剂，其中所述阳离子脂质选自HEDC、HEDODC和HE-Et-DODC：

14.权利要求11的药物制剂，其中所述阳离子脂质由可电离或不可电离的正电荷组成。

15.权利要求11的药物制剂，其中所述脂质还包含一种含类视黄醇分子的化合物。

16.权利要求11的药物制剂，其中所述方法还包括冷冻干燥所述脂质纳米颗粒包裹的RNA分子。

17.权利要求11的药物制剂，其中所述多糖选自蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖和菊粉。

18.权利要求11的药物制剂，其中所述包裹RNA分子的脂质纳米颗粒的体积加权的平均粒径为50-100nm。

19.权利要求11-18中任一项的药物制剂，其中所述包裹RNA分子的脂质纳米颗粒具有小于0.2的多分散性指数。

20.一种用于制备包裹双链RNA分子的脂质纳米颗粒的试剂盒，其中所述包裹双链RNA分子的脂质纳米颗粒是通过权利要求1-10中任一项的方法制备的，所述试剂盒包含溶于乙醇中的阳离子脂质、DOPE、甾醇和PEG脂质，其中所述阳离子脂质由结构式I组成：

其中

Z为烷基接头，C₂-C₄烷基；

Y为烷基接头，C₁-C₆烷基；

R₁和R₂互相独立地为C₁₂-C₃₀烷基或C₁₂-C₃₀烯基；

R₃和R₄互相独立地为氢、C₁-C₆烷基或-CH₂CH₂OH；

n为1-6；且

X为反荷离子；并且

其中所述方法还包括冷冻干燥所述脂质纳米颗粒包裹的RNA分子。