[发明专利]来自红花烟草的异丙基苹果酸合酶及其方法和用途

权利要求书

1.一种用于在烟草植物的至少部分中调节蔗糖酯的量或类型的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)提高异丙基苹果酸合酶基因在烟草植物中的表达或活性，其中所述异丙基苹果酸合酶基因在重组构建体中与毛状体特异性启动子可操作连接，所述异丙基苹果酸合酶基因含有下述多核苷酸，所述多核苷酸由如SEQ ID NO:1所示的序列所组成；或者编码由所述多核苷酸编码的多肽；或者其中异丙基苹果酸合酶基因编码由SEQ ID NO:2所示的多肽；以及

(ii)鉴定根据(i)所述异丙基苹果酸合酶基因的表达或活性已经被提高的植物，其中所述烟草植物中的一种或更多种蔗糖酯的量或类型与对照植物相比己经改变，所述对照植物中异丙基苹果酸合酶基因的表达或活性未得到调节，以及其中获自步骤(i)的烟草植物的视觉外观与对照植物基本相同。

2.根据权利要求1所述的方法，还包括在获自步骤(i)的植物的至少部分中测量一种或更多种蔗糖酯的量或确定其类型。

3.一种烟草制品，其包含：

(a)包含构建体、载体或表达载体的烟草植物细胞，其中所述构建体、载体或表达载体包含：

(i)与毛状体特异性启动子可操作性连接的至少一种多核苷酸，所述多核苷酸编码异丙基苹果酸合酶、由如SEQ ID NO:1所示的序列组成；或者

(ii)由(i)所述多核苷酸编码的多肽；或

(iii)与毛状体特异性启动子可操作性连接的至少一种多核苷酸，所述多核苷酸由编码SEQ ID NO:2所示的多肽的序列组成；或者

(b)通过权利要求1或2的所述方法获得的或能够获得的植物的部分；或者

(c)烟草植物的部分，其中序列为SEQ ID NO:2所示的异丙基苹果酸合酶蛋白的活性或编码所述异丙基苹果酸合酶蛋白的基因的表达是得到提高的，以及所述烟草植物的至少部分在一种或更多种蔗糖酯的组成上与对照烟草植物相比具有改变，所述对照烟草植物中异丙基苹果酸合酶的表达或活性未得到调节，以及其中所述烟草植物的视觉外观与对照烟草植物基本相同；或者

(d)植物材料，所述植物材料包含来自(b)或(c)的植物的部分的细胞或组织。

4.根据权利要求3所述的烟草制品，其中所述构建体、载体或表达载体还含有由SEQ IDNO:8所示的序列组成的启动子。

5.一种用于产生含有一种或更多种蔗糖酯的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)提供权利要求3或4所限定的烟草植物的至少部分、植物材料、或者烟草制品；以及

(ii)从其中提取蔗糖酯。

6.根据权利要求5所述的方法，还包括分离或纯化提取出的蔗糖酯。

7.根据权利要求1、2、5或6任一项所述的方法，其中蔗糖酯的一种或更多种具有下式所示的结构：

并且其中R3是乙酰基或氢；R1、R2和R4中的一个或更多个包含具有6个碳的酰基链；以及R5是乙酰基或氢。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，

R3是乙酰基；和/或

R1、R2和R4中的一个或更多个含有β-甲基戊酰基；和/或

R5是氢。

9.根据权利要求3或4所述的烟草制品，其中蔗糖酯的一种或更多种具有下式所示的结构：

并且其中R3是乙酰基或氢；R1、R2和R4中的一个或更多个包含具有6个碳的酰基链；以及R5是乙酰基或氢。

10.根据权利要求9所述的烟草制品，其中，

R3是乙酰基；和/或

R1、R2和R4中的一个或更多个含有β-甲基戊酰基；和/或

R5是氢。