[发明专利]诱导针对所有登革热病毒血清型的免疫性的疫苗及制造疫苗的方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2011年10月25日提交的美国临时专利申请No.61/550,982的优先权和权益，所述美国临时专利申请以其全文通过引用并入本文之中。

政府支持

本发明是根据国防威胁降低局(Defense Threat Reduction Agency)批准的合作协议第HDTRA1-10-1-0009号在政府支持下作出的。政府可能享有本发明的某些权利。

背景技术

登革热病毒(DENV)为黄病毒属的成员，是世界各地的热带和亚热带地区中蚊子传播的病毒性疾病的最常见原因。每年有约5000万-1亿人感染DENV。DENV感染可以是无症状的，但最常见的是表现为登革热(DF)，一种自限性疾病。登革出血热(DHF)和登革休克综合征(DSS)是登革热感染的更严重并且威胁生命的表现。DENV造成了任何蚊子传播的病毒性病原体的最大社会和经济负担之一。没有对感染的特异性治疗，而且已经证明通过接种疫苗来控制登革热病毒是难以实现的。DHF/DSS的发病机理没有被完全理解。登革热病毒有四种血清型(DENV-1，DENV-2，DENV-3和DENV-4)。一种血清型的感染能够赋予终生的同型免疫性，但是对于异型血清型只有短期(约三至六个月)的交叉保护。

在具有多于一种的循环血清型的对象中发生二次异型感染期间，严重疾病的风险是最大的。有证据表明，先前感染一种类型能够在后续感染不同的血清型期间产生可以加剧或增强疾病进程的抗体应答。疫苗组分能够引起增强性抗体应答(与保护性应答相反)的可能性已经成为设计和测试疫苗以保护不受登革热感染中的主要担忧。因此，对于可以有效针对不同的血清型并且不会增强DENV感染进程的疫苗，存在着需求。

发明内容

本文描述了形成嵌合蛋白的方法，其包括以下步骤：提供具有SEQ ID NO.1的黄热病毒17-D包膜蛋白；提供选自SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5的登革热病毒包膜蛋白；以及使SEQ ID NO.1的第1-11、28-30、32、42、44、46、70-81、95-99、110-115、142-147、149-157、236-242、304-324、333、335、337、350-352、355、356、362-370、377、379、386、388-393位氨基酸中的一个或多个被所选择的登革热病毒包膜蛋白的相应氨基酸取代以制造嵌合包膜蛋白。

本文还描述了制造治疗组合物的方法，其包括以下步骤：提供来自于黄病毒的包膜蛋白的一部分；提供选自SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5的登革热病毒包膜蛋白；使黄病毒的包膜蛋白氨基酸的一部分被所选择的登革热病毒的相应包膜蛋白氨基酸取代以制造嵌合包膜蛋白；提供药学上可接受的赋形剂；以及将嵌合包膜蛋白和赋形剂混合。

本文进一步描述了嵌合蛋白，其包含：由具有SEQ ID NO.1的黄热病毒17-D包膜蛋白组成的包膜蛋白，其中黄热病毒17-D包膜蛋白的所选择的氨基酸被选自SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5的登革热病毒包膜蛋白的相应氨基酸取代。

本文还描述了用于治疗登革热病毒的组合物，其包含：由黄病毒包膜蛋白组成的嵌合包膜蛋白，其中黄病毒包膜蛋白的所选择的氨基酸被选自SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5的登革热病毒包膜蛋白的相应氨基酸取代；以及药学上可接受的赋形剂。

附图说明

图1显示了用固定化的病毒包膜糖蛋白、患者血清和来自于DENV感染患者的单克隆抗体所进行的ELISA测定的结果。

图2显示了将DENV-1至4感染的LLC-MK-2细胞暴露在来自于DENV感染患者的单克隆抗体下所进行的免疫荧光测定的结果。

图3显示了用DENV-1至4感染的LLC-MK-2细胞、患者血清、来自于DENV感染患者的单克隆抗体所进行的中和测定的结果。

图4显示了在存在来自于DENV感染患者的单克隆抗体的情况下所进行的增强测定的病毒摄取结果。